Стаин би Маи Грунвалд-Гиемса фондација, техника и употреба



Тхе Мајска мрља Грунвалд-Гиемса Паппенхеим је диференцијална техника бојења која комбинује Гиемса и Маи Грунвалд реагенс. Користи се за диференцијацију нормалних и абнормалних крвних ћелија у размазима периферне крви и коштане сржи, као и за бојење хистолошких пресека и цитолошких узорака..

Оба реагенса - Гемса и Маи Грунвалд - су изведени из Романовски типа бојења, технике засноване на комбинацији киселина и основних боја.

Гиемса је побољшала технику стабилизацијом мешавине еозина, метилен плавог и њених деривата, са глицеролом. Насупрот томе, Маи Грунвалд користи еозин и метиленско плаво, користећи метанол као растварач. Ова стратешка комбинација је дала одличне резултате.

Иако у смислу посматрања морфологије ћелија делује слично Гиемсиним и Вригхтовим бојама, ова техника побољшава претходне тако што фино подешава обојеност паразита који узрокују маларију, Цхагасову болест, леисхманиозу и трихомонију..

Поред тога, показало се да је то веома корисна техника за цитолошку студију течности сперме. Истакнуто је не само показивањем морфолошких карактеристика сперме, већ и великом ефикасношћу леукоцита, епителних ћелија и ћелија сперматогенезе..

Индек

  • 1 Фоундатион
    • 1.1 Разноврсне боје
  • 2 Техника
    • 2.1 Материјали
    • 2.2 Концентровано раствор боје Маи Грунвалд
    • 2.3 Концентрисана Гиемса боја
    • 2.4 Припрема пуферског раствора на пХ 7.2
    • 2.5 Размазана крв или процедура бојења коштане сржи
    • 2.6 Проширена техника бојења сперматозоида
    • 2.7 Важне спецификације
  • 3 Усес
    • 3.1 Вагинална цитологија
    • 3.2 Узорак сперме
  • 4 Референце

Фоундатион

Техника прати основе Романовскијевих мрља, у којима киселе боје имају селективни афинитет према основним компонентама ћелија, а киселе компоненте привлаче основне боје.

Објашњени на други начин, и ћелијске структуре и боје имају позитивне или негативне електричне набоје; једнаки трошкови одбијају и привлаче се различите оптужбе.

На пример, основне боје као што је метиленско плаво су позитивно набијене и привучене су негативно набијеним структурама. Зато ова боја обоји језгре богате ДНК и РНК које имају негативно набијене фосфатне групе.

Грануле сегментираних базофила и цитоплазми мононуклеарних белих крвних зрнаца које садрже РНК су такође обојене.

Исто тако, кисела боја носи негативни набој, због чега се спајају позитивно наелектрисане структуре као што су еритроцити и грануле сегментираних еозинофила. Што се тиче гранула сегментираних неутрофила, оне фиксирају оба боја.

Разноликост боја

У овој техници, постоји комбинација реакција између ортохроматских боја и метахроматских супстанци. Ортохромати (еозин и метиленско плаво) се везују за ћелијску структуру на коју су повезани и дају стабилну боју која се не мења.

С друге стране, метахроматске (деривати метиленско плаве азуре А и азуре Б) варирају у својој изворној боји када се вежу за специфичну структуру, а могу постојати и разне нијансе..

Коначно, корак који је спровео Маи Грунвалд решење захтева присуство воде, јер без ње боја ће продрети у структуре, али неће бити фиксирана. Да би се то догодило, боја мора постати поларна или јонизована, и на тај начин бити у стању да се таложи и повеже са сродним структурама.

Техника

Материјали

- Слајдови за слајдове.

- Бојање мостова.

- Решење Маи-Грунвалд.

- Гиемса мрља.

- Дестилирана вода.

Концентрисано раствор боје Маи Грунвалд

Морамо извагати 0,25 г еозин-метилен плавог (боја према Маи Грунвалд) и растворити у 100 мл метанола. Смеша је затим мешана 1 сат и остављена да одстоји 24 сата. Завршио је време, филтрира.

Да би се применила техника, Маи Грунвалд боја треба да се разблажи на следећи начин: за 200 мл разблажене боје, мери се 30 мл концентрованог раствора, дода се 20 мл раствора пуфера и 150 мл дестиловане воде до пХ 7,2-7,3. . Затим се меша и филтрира.

Концентрисана Гиемса боја

Измерити 0,5 г азур-еозин-метилен плавог (боја према Гиемси), растворити у 50 мл метанола и ставити 50 мл глицерина у смешу.

За извођење технике, разриједите 1:10 с пуфером и оставите да се одмори 10 минута. Може се филтрирати ако је потребно.

Припрема пуферског раствора на пХ 7.2

Морају се вагати:

- 40 мг калијум ди-хидроген фосфата (КХ2ПО4).

- 151 мг ди-натријум хидроген фосфат 12-хидрат (На2ХПО4).

Оба једињења су растворена у 100 мл воде.

Размазана крв или поступак бојења коштане сржи

Постоје два модалитета: класичан и брз.

Класични режим

  1. Покријте размаз 2 или 3 минута са разблаженим раствором Маи-Грунвалд.
  2. Исперите пуферованом дестилованом водом да бисте елиминисали претходно решење.
  3. Покрити истим пуферованим раствором за прање и оставити 1 минут. Идеја је да је претходна боја фиксирана на структуре и да су, у исто време, ћелије хидриране.
  4. Додајте 12 капи разблажене тинктуре Гиемса на пуферирану воду и пустите да се меша и хомогенизује. Оставите да стоји 15 или 20 минута.
  5. Испрати размазом пуферованом дестилованом водом и оставити да се осуши на ваздуху.
  6. Фокусирајте и посматрајте у оптичком микроскопу крвне ћелије обојене коришћењем објектива 40Кс. Ако је потребно, може се користити 100Кс.

Куицк моде

  1. Покријте мрљу са Маи Грунвалд бојом разблаженом 1 минуту.
  2. Испрати са пуферованом дестилованом водом.
  3. Покријте пуферованом водом и оставите да стоји 1 минут.
  4. Ставите разблажену Гиемса боју и оставите 5 минута.
  5. Исперите пуферованом дестилованом водом и оставите да се осуши на ваздуху.

Овдје описане технике су водилице, али треба узети у обзир да се процедуре и времена бојања разликују овисно о комерцијалној кући која испоручује реагенсе. Препоручљиво је пратити кораке који су строго назначени у свакој комерцијалној кући.

Техника проширене боје за сперму

1. Нанесите намаз танким слојем раствора Маи Грунвалд 4 минута.

2. Уклоните боју и исперите дестилованом водом.

3- Ставите слој разређеног Гиемса (1:10) у дестиловану воду 15 минута.

4. Уклоните боју и исперите дестилованом водом.

5. Пустите да се осуши и посматрајте под микроскопом.

Важне спецификације

Техника захтева да реагенси и раствори за прање имају пХ подешен на 7.2-7.3, тако да афинитети боја за ћелијске структуре не нарушавају и не мењају коначну очекивану боју..

Усес

Ова техника се користи у клиничким лабораторијама за бојење мрља периферне крви и коштане сржи, секција ткива и цитологија..

У хематолошком пољу, ова техника је од виталног значаја за проучавање абнормалности ћелија у смислу облика, величине и броја. То је веома вриједно средство за дијагностицирање одређених болести, као што су леукемија и анемија.

Поред тога, представља изузетну корисност када се траже паразити у хематолошким пољима (Пласмодиум сп и Трипаносома црузи) или хистолошки (Леисхманиас сп).

Вагинална цитологија

Што се тиче вагиналне цитологије, ова техника је посебно погодна за посматрање Трицхомонас вагиналис. Ово је важан налаз, јер његово присуство симулира слике карцинома ин ситу који онда нестају када се паразит елиминише.

Узорак сперме

То је био идеалан алат за проучавање узорака сперме, јер пружа вриједне информације о квалитету сперме.

Подаци које нуди су углавном повезани са бројем и морфологијом, као и са пратећим ћелијама које могу бити присутне и које су од виталног значаја, као што су ћелије ћелија, леукоцити и епителне ћелије..

Овом анализом могуће је описати абнормалности уочене у сперми у глави, врату, средњем делу и главном делу..

Поред тога, они могу помоћи да се покажу случајеви хемоспермије (присуство црвених крвних зрнаца у сперми) и леукоспермија или пиоспермија (повећање броја леукоцита у сперми).

Референце

  1. Цостамагна С, Прадо М. Валидација свјежег теста, Маи Грунвалд-Гиемса и Грам боје и медијум за културу за дијагнозу Трицхомонас вагиналис. Параситол. 2001; 25 (1-2): 60-64. Доступно у: сциело.
  2. Мерцк КГаА лабораторија. Свибањ Грунвалд еосин метилен блуе за микроскопију.
  3. "Мрва Маи-Грунвалд-Гиемса." Википедиа, Тхе фрее енцицлопедиа. 15 Нов 2018, 14:37 УТЦ. 8 Јан 2019, 04:29: ен.википедиа.орг
  4. Лабораторијска стакла Цхемицалс Панреац. Реагенси за хистолошке технике, хематологију и микробиологију. Доступно на: глассцхемицалс.цом
  5. Ретамалес Е, Манзо В. Препорука за бојење размаза крви за читање крвне слике. Национална и референтна биомедицинска лабораторија. Институт за јавно здравље Чилеа.
  6. Сарабиа Л. Спермиограм према критеријумима СЗО. Програм анатомије и биологије развоја. Медицински факултет Универзитет у Чилеу Доступно на: пп.центрамерица.цом