Тетратионатна бујонска подлога, припрема и употреба

Тхе тетратионате бротх или ТТ бујон је селективна течна култура за обогаћивање и опоравак сојева салмонеле. Направио га је Муеллер и касније модификовао Кауффманн, због тога постоје они који га зову Муеллер-Кауффманн бујон.

Оригинални медијум садржи протеозне пептоне, калцијум карбонат и натријум тиосулфат. Кауффманн је додао жучне соли и створио још један модалитет са светло зеленом бојом. Ове супстанце инхибирају раст колиформа, остављајући слободни медијум за развој патогених бактерија, у овом случају Салмонелла.

Модификација је била веома успјешна јер је значајно повећала осјетљивост медија. Због тога је тренутно корисно за претраживање Салмонелла у било којој врсти узорка, али посебно за чврсте или текуће измет и храну..

Његова припрема се састоји од две фазе; комерцијални медијум је база за припремање тетратионатног бујона, а затим за формирање тетратионата, додаје се јодирани раствор јода да би се завршио медијум.

Америчка асоцијација за јавно здравље (АПХА) препоручује употребу тетионатног бујона допуњеног свијетлозеленом за обогаћивање узорака у потрази за салмонелом, будући да је селективнија од тетратионатне јухе и селенитне јухе..

Генерално, тетратионатни бујон је идеалан када се сумња да су бактерије рода Салмонелла у малим количинама или које су злоупотријебљене излагањем инхибиторним супстанцама или индустријским процесима који смањују њихову одрживост.

Индек

• 1 Фоундатион
• 2 Припрема
  • 2.1 - Тетратионат
  • 2.2-Варанте тетратионатни бујон са светло зеленом бојом
• 3 Користите
• 4 Контрола квалитета
• 5 Препоруке
• 6 Референце

Фоундатион

Ови пептони одговарају казеинским панкреасним дигестијама и пептичком варењу животињског ткива. Они обезбеђују извор угљеника, азота и хранљивих материја уопште за раст бактерија.

Са своје стране, натријум тиосулфат реагује са јодованим раствором да формира тетратионат. Ово инхибира раст колиформа и погодује развоју бактерија које садрже ензим тетратионат редуктазу, међу којима је и рода Салмонелла, али и Протеус.

Жучне соли такође делују као инхибиторна супстанца већине Грам-позитивних бактерија и неких Грам-негативних бактерија (колиформи).

Калцијум карбонат апсорбује токсичне супстанце настале разградњом тетратионата, који формира сумпорну киселину. У том смислу, калцијум карбонат неутралише киселост која одржава пХ стабилног медија.

У случају светло зеленог модалитета, ова супстанца повећава селективну снагу тетратионатног бујона тако што инхибира друге микроорганизме осим рода Салмонелла..

Препаратион

-Тетратионате бротх

Јодни раствор јода

Вагање:

• 6 грама јода.
• 5 грама калијум јодида.

Калијум јодид се раствори у приближно 5 мл стерилне дестиловане воде, затим се јод мало по мало додаје док се смеша загрева. Након што се потпуно раствори, пуни се стерилном дестилованом водом док не достигне коначну запремину од 20 мл.

Пола базе за тетратионатни бујон

Измерити 46 грама дехидрираног медијума и суспендовати у 1 литру стерилне дестиловане воде. Мешајте и загревајте док се потпуно не отопи, може да кува само неколико минута. Не стерилисати у аутоклаву. База подлоге се остави да се охлади на око 45 ° Ц и тада се дода 20 мл јодованог раствора..

Након додавања раствора иодурада у медиј треба одмах користити. Ако не желите да користите целу мешавину, поступите на следећи начин:

10 мл базног медијума се дистрибуира у епрувете, и само 0,2 мл јодираног раствора се додаје у оне које треба инокулисати узорцима..

Они који се неће користити могу се и даље чувати у фрижидеру, међутим, пошто медијум није стерилизиран, идеално је припремити потребну количину..

Боја медија пре додавања јодованог раствора јода је млечно бела са белим талогом и након додавања је браон са густим талогом. Уочени талог је нормалан и одговара калцијум карбонату који се не раствара. Крајњи пХ медијума је 8.4 ± 0.2.

-Тетрионатна варијанта са светло зеленом бојом

Да би се припремио тетратионатни бујон са светло зеленом бојом, сви кораци који су горе описани су изведени, али додатно, 10 мл бистро зеленог раствора припремљеног у 0,1% додат ће се смеши..

Светло зелено

Ово решење се припрема на следећи начин:

Измерити 0,1 г светло зелене боје и суспендовати у 100 мл дестиловане воде. Загрејати до кључања да би се постигло потпуно растварање. Уштедите у боци од јантара.

Усе

За узорке столице (култура столице) протокол је следећи:

Инокулирајте 1 г чврсте столице или 1 мл течне столице у епрувети са 10 мл готове тетратионатне бујоне. Стресајте снажно и инкубирајте у аеробиози на 43 ° Ц током 6-24 сата.

Затим, узмите аликвот од 10 до 20 μл бујона и субкултујте га у медију селективном за Салмонелла, као што је СС агар, КСЛД агар, светло зелени агар, Хектоен ентерални агар, између осталих..

Паралелно, селективни медијум за салмонелу треба инокулирати директним узорком (фецесом) без обогаћивања. За узорке ректалних бриса, скините сакупљени материјал у епрувету и наставите како је горе описано.

За узорке хране вагати 10 г чврсте хране или 10 мл течне хране и боцу инокулисати са 100 мл готове тетратионатне јухе. Наставите на исти начин као што је горе описано, али инкубирајте на 37 ° Ц.

Као што се може видети, однос између узорка и бујона ће увек бити 1:10.

Контрола квалитета

Да би се тестирао медијум културе, могу се користити познати контролни сојеви. Најчешће се користе АТЦЦ сертификовани сојеви.

Сојеви који ће се користити су Салмонелла типхимуриум АТЦЦ 14028, Салмонелла абони ДСМ 4224, Салмонелла ентеритидис АТЦЦ 13076, Есцхерицхиа цоли АТЦЦ 25922, Ентероцоццус фаецалис АТЦЦ 19433 анд Стапхилоцоццус ауреус АТЦЦ 25923.

За сојеве салмонеле очекује се одличан развој, док Есцхерицхиа цоли могу имати слаб или правилан развој, а Грам позитивни сојеви (Ентероцоццус и Стапхилоцоццус) су дјелимично или потпуно инхибирани.

Препоруке

-Пошто овај медијум не инхибира раст Протеуса, неке лабораторије користе 40 мг / Л новобиоцина да спрече развој овог микробног соја. Антибиотик треба додати пре јодираног јодног раствора.

-После припреме медијума, укључујући јодирани раствор јода, не сме бити дуже од 2 сата након инокулације.

-У тренутку расподеле медијума у ​​епрувете, смеша се мора непрекидно хомогенизовати да би се поново формирао преципитат.

-У мање контаминираним узорцима тетратионатни бујон се инкубира на 35-37 ° Ц, ау високо контаминираним узорцима препоручује се инкубација на 43 ° Ц..

Референце

1. Лабораторија Цонда Пронадиса. 2010. База тетратионатног бујона према Муеллер-Кауффманну. Доступно у:
2. БД Лабораториес 2003. База Тетратхионате Бротх. Доступно у:
3. Лабораториес Британиа. 2015. Тетионатна база. Доступно у:
4. Медиа ББЛ. 2005. Припрема епрувета за узгој врста салмонеле.
5. Форбес Б, Сахм Д, Веиссфелд А. (2009). Микробиолошка дијагностика Баилеи & Сцотт. 12 ед. Едиториал Панамерицана С.А. Аргентина.
6. Флорес-Абукапкуи Ј, Пуц-Францо М, Хередиа-Наваррете М, Вивас-Росел М, Францо-Монсреал Ј. Поређење између медијума културе натријум селенита и тетратионата натријума, оба инкубирана на 37 ° Ц и 42 ° Ц изолација Салмонелла спп столица носача. Рев Биомед 2003; 14 (4): 215-220