Темељ, припрема и употреба бујона за уреу

Тхе уреа бротх је течни медијум за културу, који се користи за доказивање присуства ензима уреазе у одређеним микроорганизмима. Уреаза је микробни ензим који се производи конститутивно, тј. Синтетише се независно од тога да ли је супстрат на коме делује или није присутан..

Функција уреазе је повезана са разградњом органских једињења. Нису сви микроорганизми способни да синтетизују овај ензим, стога његово одређивање у лабораторији омогућава идентификацију одређених бактеријских сојева, па чак и разликовање врста истог рода..

Постоје два типа теста урее: Стуарт и Цхристенсен. Разликују се по саставу и осетљивости. Први је посебан да би се показала велика количина уреазе произведене врстама рода Протеус.

Други је осетљивији и може детектовати мале количине уреазе настале касно од других бактеријских родова, као што су Клебсиелла, Ентеробацтер, Стапхилоцоццус, Бруцелла, Бордетелла, Бациллус, Мицроцоццус, Хелицобацтер и Мицобацтериум.

Бујон Стуарт уреје састоји се од урее, натријум хлорида, дикалијум фосфата, монокалијум фосфата, екстракта квасца, фенол црвеног и дестиловане воде..

Док се Цхристенсен бујон или уреа од агара састоји од пептона, натријум хлорида, монокалијум фосфата, глукозе, урее, фенол црвеног, дестиловане воде и агар-агара. Ово последње једино ако је чврсти медијум.

Индек

• 1 Фоундатион
  • 1.1 Бујон од Стуарт урее
  • 1.2 Цхристенсен бујон или агар уреа
  • 1.3 Тумачење оба медија (Стуарт и Цхристенсен)
• 2 Припрема
  • 2.1 Бујон Стуарт урее
  • 2.2 Цхристенсен бујон или агар уреа
• 3 Усес
• 4 Сетва урее теста
• 5 Контрола квалитета
• 6 Референце

Фоундатион

Ензим уреаза хидролизује уреу да формира угљен диоксид, воду и два молекула амонијака. Ова једињења реагују тако да формирају коначни производ зван амонијум карбонат.

Бујон Стуарт уреје

Бујон Стуарт уреа је више пуферисан са пХ 6,8. Због тога, микроорганизам мора бити у стању да формира велике количине амонијака да постану црвене до фенола. ПХ мора порасти изнад 8.

Стога је бујон Стуарт урее селективан за врсте Протеус, дајући позитивне резултате у 24 до 48 сати инкубације, и није ефикасан за бактерије које производе мале количине уреазе или које полако хидролизују уреју.

То је зато што су врсте Протеус способне да користе уреу као извор азота. Насупрот томе, друге бактерије које производе уреазу требају додатни извор.

Међутим, Перез ет ал. (2002) су утврдили да је бујон Стуарт урее био једнако ефикасан као и уреа агар из Цхристенсена, да би се одредила уреаза у сојевима квасаца родова Цандида, Цриптоцоццус, Рходоторула, Трицхоспорон и Саццхаромицес..

Аутори студије тврде да су постигли 100% коинциденције са оба медија (Стуарт и Цхристенсен) инкубацијом 24 и 48 сати; под условом да су узели као позитивне напетости које су успјеле претворити медије у јаку ружичасто-фуксијску боју.

Ово појашњење је неопходно, пошто је Лоддер (1970) потврдио да скоро сви квасци успевају да поставе косину урее агара Цхристенсена на бледо ружичасту. То је због тога што могу хидролизовати урее у минималним количинама, и на формирање амина оксидативним декарбоксилирањем аминокиселина на површини. Ово не треба тумачити као позитивно.

Бујон или уреа агар из Цхристенсена

Бујон или агар са Цхристенсен уреом је мање пуферисан, јер је у стању да детектује мале количине амонијака. Поред тога, овај медиј је обогаћен пептонима и глукозом. Ова једињења узрокују развој других микроорганизама који производе уреазу и не расту у Стуартовом бујону.

Исто тако, Цхристенсен уреа тест нуди брже резултате, посебно за Протеус, који је у могућности да даје јако позитивно у само 30 минута као минимално време и до 6 сати као максимално време..

Остатак микроорганизама који стварају уреазу успевају да благо промене боју после 6 сати, а снажно после 24, 48, 72 или више сати, па чак и неки сојеви могу дати слабе реакције после 5 или 6 дана..

Тумачење оба медија (Стуарт и Цхристенсен)

Медиј је првобитно жуто-наранџасте боје, а позитивна реакција ће претворити боју средње у ружичасту-фуксију. Интензитет боје је директно пропорционалан количини произведеног амонијака.

Негативна реакција ће оставити медијум оригиналне боје осим квасаца, који могу дати бледо ружичасту боју са Цхристенсен уреа агара..

Препаратион

Бујон Стуарт уреје

Измерите потребне граме према индикацијама комерцијалне куће. Растворити у пожељно стерилној дестилованој води. Не користите топлоту да би се растворила, јер је уреа осетљива на топлоту.

Метода мембранске филтрације се користи за стерилизацију. За то се користи Миллипоре филтер са порама пречника 0,45 μ. Немојте користити аутоклав. Када се раствор филтрира, дистрибуира се у стерилне епрувете. Да би се добили поуздани резултати, мора се пренијети између 1,5 мл као минимална количина до 3 мл као максимална количина по епрувети..

Чувајте у фрижидеру и држите се прије употребе.

Ако метода филтрације није доступна, медиј треба одмах да се користи за добијање поузданих резултата.

Други начин за припрему урее Стуарт бујон је следећи:

Неке комерцијалне куће продају пола базе за тест уреје, не укључујући урее.

Износ који је назначила комерцијална кућа је измерена. Раствара се у дестилованој води и стерилише у аутоклаву на 121 ° Ц током 15 минута. Нека се мало одмори, а када је медијум топао додајте 100 мл раствора урее припремљеног на 20% и стерилисајте филтрацијом.

Дистрибуира се у стерилним епруветама, као што је претходно описано.

Бујон или уреа агар из Цхристенсена

-Припрема раствора урее

Измерити 29 грама дехидриране урее и растворити у 100 мл дестиловане воде. Користите метод филтрације за стерилизацију. Немојте аутоклавирати.

-Агар у бази урее

Растворити 24 г дехидрираног базног агара у 950 мл дестиловане воде. Стерилисати у аутоклаву на 121 ° Ц током 15 минута. Оставите да стоји док не достигне температуру од 50 ° Ц и додајте претходно припремљену уреу асептично.

Сипајте 4 до 5 мл у стерилне епрувете и нагните док се не очврсне. Требало би да постоји дуги врх флауте.

Овај медијум се такође може припремити у течном облику.

Усес

Тест урее је изузетно ефикасан у разликовању рода Протеус од других родова породице Ентеробацтериацеае, с обзиром на брзу реакцију коју пружа Протеус.

Ако се користи композиција Цхристенсен, тест помаже разликовању између врста истог рода. На пример, С. хаемолитицус и С. варнери сон Стапхилоцоццус коагулаза негативно и бетахемолитичко, али се разликују у томе С. хаемолитицус то је негативна уреа и С. варнери то је позитивна уреа.

С друге стране, МцНулти је успјешно користио 2% Цхристенсен урејског бујона за проучавање присуства Хелицобацтер пилори у узорцима биопсија узетих из слузнице желуца (антрални регион).

Присуство Х. пилори то се доказује позитивним тестом урее. Трајање посматрања резултата је директно пропорционално количини присутних микроорганизама.

Као што се може видети, то је једноставан метод за дијагнозу Хелицобацтер пилори у биопсијама желуца.

Коначно, овај тест је такође користан за разликовање врста рода Бруцелла, Бордетелла, Бациллус, Мицроцоццус и Мицобацтериа.

Сетва теста за уреју

Ове две методе захтевају јак микробни инокулум за оптимизацију резултата. Бактеријске колоније се пожељно узимају из крвног агара и Сабоурауд агар квасаца, уз неке изузетке. Инокулум се емулгује у течном медију.

За бујон Стуарт уреа инкубиран на 37 ° Ц 24 до 48 сати, знајући да се само тражи сојеве рода Протеус када је сој бактерија. За квасце може се инкубирати на 37 ° Ц или на собној температури 24 до 48 сати инкубације.

У случају бујона Цхристенсен уреје, инкубирајте на 37 ° Ц током 24 сата. Ако је тест негативан, може се инкубирати до 6 дана. Ако је тест позитиван пре 6 сати, то указује да је то сој рода Протеус.

У случају Цхристенсен уреа агара, агар косина се снажно инокулира, без пробијања. Бујон се инкубира и интерпретира на исти начин.

Контрола квалитета

Контролни сојеви се могу користити за тестирање медија, као што су Протеус мирабилис АТЦЦ 43071, Клебсиелла пнеумониае  АТЦЦ 7006003, Есцхерицхиа цоли АТЦЦ 25922 и Салмонелла типхимуриум.  Прва два морају дати позитивне резултате и посљедња два негативна резултата.

Референце

1. Перез Ц, Гоитиа К., Мата С, Хартунг Ц, Цолелла М, Реиес Х. ет ал. Употреба бујона Стуарт урее за тест уреазе, као тест у дијагностици квасаца. Рев. Соц. Мицробиол. 2002; 22 (2): 136-140. Доступно на: Сциело.орг.
2. Мац Фаддин Ј. (2003). Биохемијски тестови за идентификацију бактерија од клиничког значаја. 3рд ед. Едиториал Панамерицана. Буенос Аирес Аргентина.
3. Форбес Б, Сахм Д, Веиссфелд А. (2009). Микробиолошка дијагностика Баилеи & Сцотт. 12 ед. Едиториал Панамерицана С.А. Аргентина.
4. Конеман Е, Аллен С, Јанда В, Сцхрецкенбергер П, Винн В. (2004). Микробиолошка дијагноза. 5тх ед. Едиториал Панамерицана С.А. Аргентина.
5. Лабораториес Британиа. Цхристенсен Медио (база за агар уреа) 2015. Доступно на: британиалаб.цом