Темељ, припрема и употреба ЕЦ бујона

Тхе ЕЦ бротх или бујон Есцхерицхиа цоли То је селективни течни медијум за културу. Овај медијум се препоручује стандардним методама за бројање укупних и фекалних колиформних бактерија, техником највјероватнијег броја (НМП) у узорцима воде и хране, гдје је главни узрочник Есцхерицхиа цоли.

ЕЦ бујон је састављен од триптеина, лактозе, жучних соли, дикалијум фосфата, монокалијум фосфата, натријум хлорида и воде. Његова формула је стратешки дизајнирана тако да погодује расту укупних и фекалних колиформа и спречава развој других пратећих микроорганизама.

Бактерија Есцхерицхиа цоли је главни фекални колиформ који је присутан као контаминант у води и изворима хране, узрокујући значајне гастроинтестиналне утицаје.

Треба напоменути да постоји много серотипова Есцхерцхиа цоли; међу њима можемо поменути ентерохеморагични (ЕХЕЦ), ентероинвазивни (ЕИЕЦ), ентеропатогени (ЕПЕЦ), ентеротоксигенски (ЕТЕЦ) и ентероагрегативни (ЕАЕЦ).

То значи да има способност да дозволи развој свих њих, али без могућности да их разликује. Да би се то урадило, морају се извршити додатни тестови.

Микробиолошка студија воде и хране по највјероватнијем броју (НМП) за претрагу тоталних и фекалних колиформа је протокол који је усаглашен са неколико фаза; претпостављена фаза, фаза потврде и фаза завршетка. ЕЦ бујон се користи у фази потврђивања.

Индек

• 1 Фоундатион
  • 1.1 ЕЦ бротх
  • 1.2 ЕЦ бујон модификован са новобиоцином
• 2 Припрема
  • 2.1 ЕЦ бујон
  • 2.2 ЕЦ бујон модификован са новобиоцином
• 3 Користите
  • 3.1 Анализа укупних и фекалних колиформа
• 4 Контрола квалитета
• 5 Препоруке
• 6 Референце

Фоундатион

ЕЦ Бротх

ЕЦ медијум се заснива на обезбеђивању неопходних нутритивних елемената за оптималан развој укупних и фекалних колиформа, где је бактерија укључена Есцхерицхиа цоли.

Ове нутритивне елементе обезбеђује триптеин, што је одличан извор пептида и аминокиселина. Поред тога, садржи и лактозу, ферментабилни угљени хидрат који обезбеђује енергију и омогућава да се покаже да ли бактерија производи гас.

С друге стране, медиј садржи жучне соли које дају селективни карактер, јер инхибира раст Грам-позитивних микроорганизама који могу бити присутни у узорку..

Исто тако, дикалијум фосфат и монокалијум фосфат делују као систем за балансирање пХ вредности. Овај систем је неопходан, јер лактоза садржана у бујону тежи да закисели медијум када се ферментира микроорганизмима, али то се компензује фосфатним солима..

Стога су ови елементи суштински важни, јер неконтролисана киселост може утицати на правилан развој тражених микроорганизама.

Са своје стране, натријум хлорид стабилизује медијум осмотски, док је вода растварач присутних раствора и обезбеђује течну конзистенцију медијума.

ЕЦ бујон модификован са новобиоцином

Окренд и Росе су креирали разне ЕЦ бројеве, назване ЕЦ бујон модификоване са новобиоцином. Модификација се састојала у смањењу концентрације жучних соли и додавању 20 мг / дл новобиоцина.

Ова модификација погодује опоравку сојева Есцхерицхиа цоли ентерохеморрхагиц (О157: Х7).

Овај бактеријски серотип узрокује озбиљан хеморагични колитис који може изазвати хемолитички уремички синдром (ХУС); што може изазвати акутну бубрежну инсуфицијенцију, са високом стопом смртности која може досећи и до 50% у старијих особа.

Због морбидитета и морталитета које ова бактерија узрокује годишње због конзумирања контаминиране хране, Министарство пољопривреде Сједињених Америчких Држава (УСДА) широко препоручује употребу овог средства.

Препаратион

ЕЦ Бротх

Измерити 37,4 г дехидрираног медијума и растворити у 1 литри дестиловане воде. Мешавину треба оставити да одстоји 5 минута. Након тога, у извору топлоте, раствори се често.

Једном растворен, дистрибуира се у епруветама које су претходно кондициониране са Дурхам цевчицом. Стерилисати у аутоклаву на 121 ° Ц током 15 минута.

ПХ медијума треба да буде 6,9 ± 0,2. Боја дехидрираног медија је беж и припремљена је свијетло јантар.

Вина се чувају у фрижидеру до употребе. У време коришћења чорбе морају бити на собној температури.

С друге стране, ЕЦ бујон се такође може припремити у двострукој концентрацији.

ЕЦ бујон модификован са новобиоцином

Измерити 36,7 г дехидрираног медијума и растворити у 1 литри воде. Остатак препарата је исти као горе описан.

Усе

Анализа укупних и фекалних колиформа

ЕЦ бујон је идеалан за потврдну фазу проучавања колиформа методом НМП, како у узорцима воде, тако иу фармацеутским производима и храни..

Лени мутни и бујони за производњу гаса добијени у вероватној фази треба да се поново нађу у 2% светло зеленој жучи и ЕЦ бујону.

За укупне колиформне бактерије ЕЦ броји се инкубирају у аеробиози 24 до 48 сати на 37 ° Ц, а за фекалне колиформе се инкубирају у аеробиози 24 до 48 сати на 44 ° Ц.

У оба случаја то се тумачи на следећи начин: мутне цеви са производњом гаса се сматрају позитивним. Ако нема производње гаса у року од 24 сата, инкубација се наставља до 48 сати.

ЕЦ позитивни бујони прелазе у комплетну потврдну фазу, која се састоји од поновног засијавања у селективним медијумима као што су Мац Цонкеи агар, ЕМБ агар или Ендо агар..

Ако се користи бујон ЕЦ модификован са новобиоцином, препоручује се да се позитивне епрувете поново користе на Мац Цонкеи агару са сорбитолом.

Контрола квалитета

Контрола квалитета мора бити извршена на свакој шаржи припремљеног медија. Прво, мора се процијенити стерилност медија. У том смислу, једна или две чорбе се инкубирају без инокулације у аеробиози 24 сата на 37 ° Ц. Очекивани резултат је транспарентан бујон, без замућења или промене боје.

Друго, треба проценити раст познатих сојева, за које се могу користити следеће бактерије: Есцхерицхиа цоли, АТЦЦ 8739, Есцхерицхиа цоли АТЦЦ 25922, Салмонелла типхимуриум АТЦЦ 14028.

У свим случајевима очекује се задовољавајући развој микроба, посматрајући мутну бујон за производњу гаса Е. цоли и без гаса за салмонелу.

Други сојеви који могу бити укључени у контролу су: Стапхилоцоццус ауреус АТЦЦ 25923, Ентероцоццус фаецалис АТЦЦ 29212. Ови сојеви морају бити потпуно инхибирани.

Препоруке

-Постављање Дурхам цеви је од суштинског значаја за проучавање колиформа.

-Дистрибуирајте медијум у епрувете пре стерилизације, никада након тога.

-Не користити ако медиј има више од 3 месеца припреме.

-Не користите ако постоји било каква промена у уобичајеним карактеристикама подлоге.

Референце

1. Лабораториес Британиа. ЕЦ Медиум. 2015. Доступно на: британиалаб.цом
2. Е. цоли ентерохеморрхагиц. Центар за безбједност хране и јавно здравље. 2010. Доступно на: цфспх.иастате.еду
3. Неоген Цорпоратион. Медиум ЕЦ. Доступно на: фоодсафети.неоген.цом
4. Неоген Медијум ЕЦ модификован са новобиоцином. Доступно на: фоодсафети.неоген.цом
5. Јуре М, Цондори С, Леотта Г, Цхинен И, Миливебски Е, Аллори Ц, Аулет О, Цастилло М. Детекција, изолација и карактеризација Есцхерицхиа цоли произвођач токсина Схига из свјежег мљевеног меса из месница у Цонцепцион, покрајина Туцуман. Рев Мицрогол би Арг; 2010, 42 (4): 284-287. Доступно на: ввв.сциело.орг.