Основа лактозадног бујона, припрема и употреба



Тхе бујон лактозе је течна, неселективна подлога за културу, која се углавном користи као медијум за пред-обогаћивање у изолацији сојева салмонеле из микробиолошке анализе која је изведена на процесираној храни, млечним производима или води. Ово је препоручено од стране Међународне комисије за микробиолошке спецификације за храну (ИЦМПФ).

Медиј садржи ензимску дигестију желатине, екстракта меса и лактозе, супстанци неопходне за раст бактерија. Поред тога, лактоза је ферментабилни угљикохидрат, тако да се неки колиформи могу подијелити с производњом плина.

Из тог разлога, бујон лактозе је препоручен од стране Америчке асоцијације за јавно здравље (АПХА) за претпостављено истраживање укупних и фекалних колиформних бактерија, квалификујући га као одличну алтернативу да замени лаурил сулфат триптозни бујон у стандардној техници најизгледнијег броја (НМП). ), који се користи за микробиолошку анализу узорака хране, млека и површинских вода, подземних, рекреативних, домаћих и индустријских отпадака.

Индек

  • 1 Фоундатион
  • 2 Припрема
  • 3 Усес
    • 3.1 Пре-обогаћивање
    • 3.2 Анализа укупних и фекалних колиформа
  • 4 Контрола квалитета медија
  • 5 Референце

Фоундатион

За микробиолошку анализу неких узорака, корак пре-обогаћивања је од суштинског значаја да би се могао повратити одређени микроорганизам који може бити у веома малој количини или под неповољним условима који нарушавају или минимизирају његову виталност..

Такав је случај суве и прерађене хране, можда контаминиране Салмонеллас сп. У овим случајевима, ако су бактерије присутне, претрпеле су физичко и хемијско злостављање током процеса производње производа..

На такав начин да су микроорганизми изложени неповољним факторима као што су дехидрација, излагање инхибиторним или токсичним производима, и преклапање које настаје присуством других бактерија у већој количини, између осталог..

У том смислу, бујон лактозе има поправљајући ефекат на оштећене структуре микроорганизма, узрокујући да се опорави и репродукује, на такав начин да се може открити..

Исто тако, лактозни бујон има способност да разблажи инхибиторне супстанце које могу да утичу на његову виталност, дозвољавајући његов развој. Поред тога, нутритивни састав бујона лактозе је стратешки погодан за раст Салмонелла сп изнад других микроорганизама.

За коначну идентификацију, она се мора култивисати према другим средствима дефинитивних усева.

С друге стране, састав медијума такође омогућава детектовање микроорганизама који ферментишу лактозу који производе гас.

Препаратион

За припрему једног литра бујона лактозе, измерити 13 грама дехидрираног медија и растворити у 1000 мл дестиловане воде.

Да бисте растворили медијум у води, можете загрејати отопину, али не превише..

Када је хомогена, раствор се припрема на следећи начин: ако се бујон користи за тражење колиформа, припрема се сталак са епруветама, а Дурхамова ферментациона цев се поставља наопако..

Дурхамова цев је веома важан детаљ, јер ће омогућити детекцију формирања гаса, вредне податке у потрази за колиформима.

Када су епрувете спремне, у њих се стави 10 мл лактозног бујона, који мора бити довољан да покрије целу Дурхам цев..

Ако се бујон лактозе користи као пред-обогаћени бујон, није неопходно поставити Дурхам ферментациону цев. У овом случају, потребна је већа количина медија (225 мл), који ће бити послужен у боцама од 500 мл, широка уста и са термо-отпорним навојним затварачем..

Након тога, епрувете или бочице се стављају у аутоклав на 121 ° Ц током 15 минута.

Медиј треба да остане на крајњем пХ од 6,9 ± 0,2 на 25 ° Ц.

Вина се чувају у фрижидеру до употребе.

Пре употребе, чорбе морају бити каљене на собној температури.

С друге стране, бујон лактозе се такође може припремити у двострукој концентрацији.

Неке лабораторије додају бромокрезолно љубичасто у бујон лактозу као индикатор пХ, да би показале епрувете где је дошло до ферментације лактозе променом боје. У овом случају бујон поприма љубичасту боју и ако ферментација постане жута.

Усес

У микробиолошкој лабораторији лактозни бујон се широко користи као релативно јефтин медиј који нуди поуздане и брзе резултате (24-48 сати).

Може се користити за анализу укупних и фекалних колиформних бактерија у води и храни или као преднаметнички бујон за салмонелу.

Пре-обогаћивање

Претходно обогаћивање је корак прије обогаћивања узорка, што значајно побољшава опоравак бактерија рода Салмонелла у прерађеним намирницама.

Да би се то урадило, узорак чврсте хране (25 грама) или течности (25 мл) се засеје у 225 мл бујона лактозе и инкубира 24 до 48 сати. После тога, селенитни цистински бујон или тетратионатни бујон ће бити субкултивисан у обогаћеном медију. Затим прелази на селективне медије КСЛД и СС.

Анализа укупних и фекалних колиформа

То је одлично средство као индикатор фекалне контаминације.

Због тога је бујон лактозе идеалан за вероватну фазу колиформне студије методом највјероватнијег броја..

За узорке у којима се сумња на велику количину колиформа инокулира се мања количина колиформа (1 мл), док се за узорке у којима постоји сумња на мање колиформне бактерије инокулира више волумена (10 мл)..

За анализу је направљено 10 разблажења-1, 10-2, 10-3, формирање батерија од 3-5 цијеви за сваку кориштену концентрацију.

Из сваког разблажења се исти волумен сије у лактозне бујоне.

Епрувете се инкубирају 24 сата. Бујони који су негативни инкубирани су још 24 сата.

Интерпретација резултата се врши посматрањем двеју карактеристика: прва је присуство или одсуство замућености и пошто овај медијум не садржи пХ индикатор, неће бити промене боје.

Други је производња или не. Гас се лако демонстрира у Дурхам цевима, појавом једног или више мехурића ваздуха.

Сматра се позитивним ако се посматрају обје карактеристике, односно замућеност производње гаса. Позитивне епрувете треба поново насадити у медијуму за потврду (бујон Бриллиант Греен 2% жуч и ЕЦ бујон).

Контрола квалитета медија

- Приликом припреме медија важно је не заборавити ставити Дурхамс цијеви ако је сврха истог проучавање колиформа.

- Немојте прегрејати медијум пре стерилизације.

- Дистрибуирајте у епрувете пре стерилизације, никада после.

- Не користити ако медиј има више од 3 месеца припреме.

- Не користите ако приметите било какву промену у уобичајеним карактеристикама подлоге.

- Приликом припреме шарже лактозне бујоне, тестирајте квалитет гајења сојевима познатим као Есцхерицхиа цоли, Ентеробацтер аерогенес , Цитробацтер фреундии и Клебсиелла пнеумониае. Врло добро расту, уз производњу плина (позитивна контрола).

- Такође може да укључи Псеудомонас аеругиноса, Салмонелла типхимуриум о Ентероцоццус фаецалис, које добро расту, али без производње гаса (негативна контрола).

- Треба напоменути да је првобитна боја дехидрираног медија беж, а боја припремљена врло бистра и прозирно жута. Ако дође до промене боје или изгледа, може доћи до пропадања исте.

Референце

  1. Ацеведо Р, Северицхе Ц, Цастилло М. Биологија и микробиологија животне средине. (2013) 1. издање. Универзитет Цартагенас, Колумбија.
  2. Цамацхо А, Гилес М, Ортегон А, Палао М, Серрано Б и Велазкуез О. (2009). Технике за микробиолошку анализу хране. 2нд ед. Хемијски факултет, УНАМ. Мексико.
  3. Лабораториес Цонда Пронадиса. 2017. Двострука концентрација лактозног бујона (Еуропеан Пхарм.)
  4. Фернандез-Рендон Ц, Баррера-Есцорциа Г. Поређење техника екстракције колиформних бактерија из језерског седимента Ксоцхимилцо, Мексико. Рев. аргент. мицробиол.  2013; 45 (3): 180-184. Доступно на: сциело.орг.
  5. Сотомаиор Ф, Виллагра В, Цристалдо Г, Силва Л, Ибанез Л. Одређивање микробиолошке каквоће артешких бунарских вода округа Централне, Цордиллера и Капиталне општине. Мем. Инст. Циенц. Здравље 2013; 11 (1): 5-14. Доступно од: сциело.иицс.