Пептонски водени фонд, припрема и употреба

Тхе пептонада ватер то је неселективно течно средство за обогаћивање, које се углавном користи као разблаживач за узорке хране или друге материјале. То значи да је са хемијске тачке гледишта врло једноставно, садржи пептоне од меса, натријум хлорид и воду.

Има одређену нутритивну вредност која омогућава обогаћивање узорка. Ако постоје похабане бактерије, ово средство има моћ да поправи одрживост. Посебно је корисна у опоравку бактерија које припадају породици Ентеробацтериацеае.

У случају опоравка салмонела, препоручује се употреба пуфериране варијанте пептонада воде; Ово служи као средство за претходно обогаћивање узорка, у овом случају садржи друге елементе као што је динатријум фосфат и дикалијум фосфат.

Обично се вода пептонаде припрема на неутралном пХ, али постоје и друге варијанте где је неопходно да пХ ​​буде 8,5 ± 0,2 (алкална), јер је бактерија која се изолује алкалофилна, као на пример Вибрио цхолерае.

С друге стране, овај медиј се може користити као основни медијум за тестове ферментације угљених хидрата.

Индек

• 1 Фоундатион
• 2 Припрема
  • 2.1 Припрема дома (некомерцијална)
  • 2.2 Припрема употребом комерцијалног медија
  • 2.3 Припрема за тестове ферментације
  • 2.4 Остале варијанте пептонада воде
• 3 Користите
  • 3.1 Узорци столице
  • 3.2 Узорци хране
• 4 Контрола квалитета
• 5 Ограничења
• 6 Референце

Фоундатион

Пептони обезбеђују хранљиве састојке потребне за развој бактерија, посебно аминокиселине азота и кратког ланца, док натријум хлорид одржава осмотску равнотежу.

Поред тога, медијум омогућава дисперзију, хомогенизацију и поправку бактеријских ћелија које су оштећене индустријским процесима..

Као разређивач је идеалан, ефективно замењујући физиолошки раствор (ССФ) или фосфатни пуфер (ПБС).

Бактеријски раст је евидентан посматрањем замућености.

Препаратион

Домаћа припрема (некомерцијална)

Измерити 1 г пептона и 8,5 г натријум хлорида, растворити у 1 литри дестиловане воде. ПХ треба подесити на 7.0. За ово можете користити 1 Н натријум хлорид.

Припрема употребом комерцијалног медија

Измерити 15 г дехидрираног медијума и растворити у једном литру дестиловане воде. Хомогенизујте смешу. Ако је неопходно, смеша се кува 1 минут да се помогне потпуно растварање. По потреби послужите у бочицама од 100 мл или у епруветама од 10 мл. Аутоклавујте 15 минута на 121 ° Ц.

Охладити и користити или чувати у фрижидеру. Крајњи пХ медијума је 7.2 ± 0.2.

Боја дехидрираног медијума је свијетло беж и припремљена је свијетло јантар.

Припрема за тестове ферментације

Претходном препарату - пре стерилизације - угљене хидрате треба додати до коначне концентрације од 1%, плус Андраде индикатор (киселински фуксин) или фенол црвени (0.018 г / Л). Дурхам звоно за посматрање формирања гаса треба поставити на цеви.

Остале пептонада варијанте воде

-Пептонска вода пуферирана или пуферирана

Садржи ензимски хидролизат казеина, натријум хлорид, калијум дихидроген фосфат и натријум хидроген фосфат додекахидрат. Крајњи пХ је 7.0 ± 0.2.

За његову припрему, извагати 20 г дехидрираног медија и растворити у 1 литри дестиловане воде. Оставите стајати приближно 5 минута. Загрејте 1 минут док се потпуно не отопи.

Сипајте у одговарајуће боце по потреби. Стерилисати помоћу аутоклава на 121 ° Ц током 15 минута.

-Алкална вода

Измерити 25 г дехидрираног медијума и растворити у 1 литри воде. Наставите као што је горе описано. ПХ се креће од 8,3 до 8,7.

Усе

Инокулум се обавља тако што се узорак ставља директно.

Користи се за разређивање узорака, посебно када се сумња да постоје оштећене бактерије. Обично су разблажења 1:10 и 1: 100.

Инкубирајте 24 сата у аеробиози на 35-37 ° Ц.

Узорци столице

За узорке столице у потрази за салмонелом препоручује се употреба пуфериране или пуфериране воде као медија за пред-обогаћивање..

Да бисте то урадили, поступите на следећи начин:

Ако се формира столица, узмите 1 г узорка. Ако су течне, узмите 1 мл столице и суспендујте у епрувети са 10 мл пуфериране пептониране воде. У случају ректалног бриса, испразните материјал који је садржан у брису у епрувету са пуферираном пептонском водом.

У свим случајевима, добро промешајте и хомогенизујте узорак.

Инкубирајте на 37 ° Ц 18 до 24 сата. Потом се култивишу у бујону за обогаћивање, као што је селенитни цистински бујон или тетратионатни бујон на 37 ° Ц током 18-24 сата. Коначно се култивишу у селективним медијумима за Салмонелла, као што су СС агар, КСЛД агар, Хектоен агар, између осталих.

Узорци хране

Пептонска вода се користи као медиј за обогаћивање или као једноставан разблаживач, али ако се траже врсте Салмонелла, користи се као медијум за пред-обогаћивање, као што је већ описано..

У намирницама поступите на следећи начин:

За чврсте намирнице тежи 25 грама узорка, а за течне намирнице 25 мл узорка. Наведени део ставите у бочице које садрже 225 мл пептониране воде. Мешати и хомогенизовати узорак.

Ако се сумња да је микробиолошко оптерећење велико, могу се направити разређења или децимале да би се олакшало бројање јединица које формирају колоније (ЦФУ).

Број разблажења ће зависити од типа узорка и аналитичког искуства.

Ако се, напротив, сумња да је микробиолошко оптерећење веома ниско, није потребно правити разрјеђења. Након тога, субкултивирати у селективним медијима.

У случају хране из мора, као што су плодови мора, риба, између осталог, у потрази за Вибрио цхолерае или друге врсте Вибрио, треба користити пептонску воду подешену на пХ 8.5 (алкална пептонирана вода).

Контрола квалитета

Из сваке припремљене шарже, једна до две епрувете треба инкубирати без инокулације 24 сата у аеробиози на 37 ° Ц. На крају времена не треба посматрати замућеност или промену боје.

Такође, добро познати контролни сојеви могу се користити за процену њихове ефикасности:

За ово се могу користити следећи бактеријски сојеви: Есцхерицхиа цоли АТЦЦ 25922, Есцхерицхиа цоли АТЦЦ 8927, Стапхилоцоццус ауреус АТЦЦ 6538, Псеудомонас аеругиноса АТЦЦ 9027, Салмонелла типхимуриум АТЦЦ 1428, Салмонелла ентеритидис АТЦЦ 13076.

У свим случајевима очекује се задовољавајући развој микроба, који се опажа замућеношћу медија.

Ограничења

-Дехидрирани медијум је веома хигроскопан, па га треба држати даље од влаге.

-Медијум се не сме користити ако се примети нека врста погоршања.

-Дехидрирани медијум за културу треба чувати на температури између 10 - 35 ° Ц

-Припремљени медијум треба чувати у хладњаку (2-8 ° Ц).

Референце

1. Цамацхо А, Гилес М, Ортегон А, Палао М, Серрано Б и Велазкуез О. Технике за микробиолошку анализу намирница. 2009, 2нд ед. Хемијски факултет, УНАМ. Мексико Верзија за администратора приручника и докумената (АМиД) Хемијског факултета, УНАМ 1. Доступно на: хттп://депа.фкуим.унам.мк
2. Лабораториес Британиа. Буферирана вода. 2015. Доступно на: британиалаб.цом
3. Неоген Лабораториес Пептоне ватер. Доступно на: фоодсафети.неоген.цом
4. Лабораториес Британиа. Пептоне ватер. 2015. Доступно на: британиалаб.цом
5. Мерцк Лабораториес Буфферед пептоне ватер. Доступно на: мерцкмиллипоре.цом
6. Лабораториес Цонда Пронадиса. Алкална вода. Доступно на: цондалаб.цом
7. Форбес Б, Сахм Д, Веиссфелд А. (2009). Микробиолошка дијагностика Баилеи & Сцотт. 12 ед. Едиториал Панамерицана С.А. Аргентина.