Вогел-Јохнсон Агар темељ, припрема и употреба



Тхе Вогел-Јохнсон агар је чврсти, селективни и диференцијални медијум културе, посебно формулисан за изолацију Стапхилоцоццус ауреус. Овај медијум су креирали Вогел и Јохнсон 1960. године од модификације глицин телуритног агара формулисаног 1955. године Зебовиц, Еванс и Нивен.

Модификација се састојала у повећању концентрације манитола присутног у подлози и уградњи пХ индикатора. Садашња формула је састављена од троугла, екстракта квасца, манитола, дикалијум фосфата, литијум хлорида, глицина, фенол црвеног, агара, 1% раствора калијум телурита и воде..

Треба напоменути да постоје и други начини који су, попут Вогел-Јохнсоновог агара, селективни за изолацију С. ауреус, као што је сољени манитол агар и Баирд Паркер агар. У том смислу, може се рећи да је темељ Вогел-Јохнсон агара смјеса између сланог манитол агара и Баирд Паркер агара..

У првој колонији С. ауреус Разликују се ферментацијом манитола и претварањем пХ индикатора у жуту. С друге стране, у другом С. ауреус карактерише се редукцијом телурита у телурију и формирање сиве до црне колоније. Оба својства су уочена у Вогел-Јохнсон агару.

Овај медијум, као и његови колеге, је користан за детекцију Стапхилоцоццус ауреус у узорцима хране, санитарним контролама индустријских производа иу клиничким узорцима.

Индек

  • 1 Фоундатион
    • 1.1 Допринос хранљивих материја
    • 1.2 Селективна снага
    • 1.3 Диференцијална снага
    • 1.4 Осмотска равнотежа и средство за солидификацију
  • 2 Припрема
    • 2.1 1% в / в раствор калијум-телурита
    • 2.2 Вогел-Јохнсон-ов агар-базни медијум
  • 3 Користите
  • 4 Контрола квалитета
  • 5 Референце

Фоундатион

Допринос хранљивих материја

Вогел-Јохнсон-ов медијум садржи триплеин и екстракт квасца; обе супстанце обезбеђују аминокиселине дугог ланца које служе као извори угљеника и азота неопходни за раст бактерија. Бактерије које могу расти у овом медију ће узети хранљиве састојке из ових супстанци.

Селективна снага

Вогел-Јохнсон агар може инхибирати раст Грам-негативних бактерија, па чак и неких Грам-позитивних бактерија, фаворизирајући развој коагулаза-позитивних стафилокока. Инхибирајуће супстанце су калијум телурит, литијум хлорид и глицин.

Диференцијална снага

Супстанце које чине овај диференцијални медијум су манитол и калијум телурит. Манитол је угљикохидрат, а када се ферментира, настају киселине које претварају медијум из црвене у жуту, што се дешава захваљујући присуству фенолног црвеног пХ индикатора..

Док се безбојни телурит, када је сведен на металик без телурида, узима тамно сиву до црну боју.

Тхе Стапхилоцоццус ауреус ферментира манитол и редукује телурит у телурију. Зато су типичне колоније С. ауреус у овом медију они су сиви или црни окружени жутим медијем.

Бактерије које расту у овом медију и не смањују телурит или фермент манитол, формирају прозирне колоније окружене црвеном средином, чак и интензивније од оригиналне боје, због алкализације медија употребом пептона..

С друге стране, бактерије које смањују телурит, али не ферментирају манитол ће расти као сиве или црне колоније окружене тамно црвеном бојом..

Ако је медијум припремљен без додатка калијумовог телурита, колоније од С. ауреус развиле би се као жуте колоније, окружене жутим медијем, као што је у сланом манитол агару.

Осмотска равнотежа и средство за солидификацију

Дипотассиум фосфат одржава осмотску равнотежу медија и подешава пХ на неутралност. 7.2. Док агар даје чврсту конзистенцију медијуму културе.

Препаратион

1% раствор калијум-телурита в / в

Овај раствор није укључен у дехидрирану подлогу, јер се не може стерилисати у аутоклаву. Из тог разлога се припрема одвојено и додаје се стерилисаној подлози.

Неке комерцијалне куће продају готову отопину калијум-телурита од 1%. Ако желите да се припремите у лабораторији, поступите на следећи начин:

Измерити 1,0 г калијумовог телурита и измерити 100 мл дестиловане воде. Телурит калијума растворите у дијелу воде и затим довршите количину воде док не достигнете 100 мл. Стерилизујте раствор методом филтрације.

Вогел-Јохнсон-ов агар-базни медијум

Измерити 60 г дехидрираног медија и растворити у 1 литри дестиловане воде. Смеша се загрева до кључања да се потпомогне потпуно растварање. Током процеса растварања, медијум се често мијеша.

Стерилисати у аутоклаву на 15 фунти притиска и 121 ° Ц током 15 минута. Уклоните из аутоклава и оставите да стоји док медијум не достигне температуру од приближно 45 до 50 ° Ц. Додати 20 мл претходно припремљеног раствора калијум-телурита до 1%.

Мешати и сипати у стерилне петријеве посуде. Оставити да се очврсне и наручити обрнуте плакете за касније складиштење у фрижидеру до употребе.

Коначни пХ припремљеног медија треба да буде 7,2 ± 0,2.

Пре постављања узорка, сачекајте да плоча преузме температуру околине.

Боја припремљеног медија је црвена.

Усе

Иако се може користити за изолацију С. ауреус у било којој врсти узорака, најчешће се користи за микробиолошку анализу фармацеутских производа, козметике и хране.

Препоручује се да инокулум буде густ. Засејавање се може вршити стриацијом са платинастом дршком или површином са Дригалским шпатулом.

Плоче се инкубирају на 35-37 ° Ц 24 до 48 сати у аеробиози.

Контрола квалитета

Да би се извршила контрола квалитета Вогел-Јохнсоновог медија, могу се користити следећи контролни сојеви:

Стапхилоцоццус ауреус АТЦЦ 25923, Стапхилоцоццус ауреус АТЦЦ 6538, Стапхилоцоццус епидермидис АТЦЦ 12228, Есцхерицхиа цоли АТЦЦ 25922 или Протеус мирабилис АТЦЦ 43071.

Очекивани резултат је следећи: за сојеве С. ауреус Задовољавајући раст са црним колонијама окружен жутим медијем. То С. епидермидис правилан раст са прозирним или црним колонијама окружен црвеним медијем.

Исто тако, за Е. цоли очекује се да ће бити потпуне инхибиције и за Протеус мирабилис делимична или потпуна инхибиција; ако расте, то ће чинити штедљиво, а колоније ће бити црно окружене средње црвеном бојом.

Референце

  1. БД Лабораториес. ВЈ (Вогел и Јохнсон Агар). 2006. Доступно на: бд.цом
  2. Лабораториес Британиа. Вогел-Јохнсон Агар. 2015. Доступно на: британиалаб.цом
  3. Лабораториес Британиа. Калијум телурит. 2015. Доступно на: британиа.цом
  4. Химедиа Лаборатори. Вогел-Јохнсон Агар Медиум. 2018. Доступно на: химедиалабс.цом/ТД/МУ023.пдф
  5. Вогел-Јохнсон Агар Басе. Мерцк Мицробиологи Мануал. 12. издање, стр. 502-503. Доступно у: Усерс / Теам / Довнлоадс
  6. Сарадници Википедиа, "Агар Вогел Јонхсон", Википедиа то енцицлопедиц ливре,   диспонивел ем: википедиа.орг.
  7. Венецуелански стандард Цовенин 1292-89. (1989). Храна Изолација и бројање Стапхилоцоццус ауреус. Доступно у:сенцамер.гоб.ве