Фондација, припрема и употреба ТСГ Агар



Тхе ТСИ агар или гвожђе троструки шећерни агар је чврсти медијум културе који служи као биохемијски тест за вођење почетне идентификације грам негативних бацила. Заснива се на доказивању ферментације присутних шећера и производњи сумпороводика и гаса.

Његов састав и подлога веома је сличан Клиглеровом тесту гвожђа, с тим што ова посљедња садржи само глукозу и лактозу. Уместо тога, као што име имплицира, троструко гвожђе садржи три угљена хидрата: глукозу, лактозу и сахарозу..

Поред тога, ТСИ медијум има четири протеинска деривата који га чине веома храњивим агром: екстракт квасца, екстракт меса, пептон и протеозни пептон. Садржи и железов амонијум сулфат, натријум тиосулфат, натријум хлорид, фенол црвени и агар.

Неспособност микроорганизма да ферментира присутну глукозу у медијуму одмах је искључује из породице Ентеробацтериацеае. Дакле, овај тест је неопходан да би се одлучило који пут идентификације треба узети за одређивање рода и врста.

Свака лабораторија одлучује да ли ради са ТСИ агар или Клиглер агар агар.

Индек

  • 1 Фоундатион
    • 1.1 Натријум хлорид и агар
    • 1.2 пХ индикатор (фенол црвени)
    • 1.3 Деривати протеина (екстракт квасца, екстракт меса, пептон и протеозни пептон)
    • 1.4 Ферментација угљених хидрата (глукоза, лактоза и сахароза) \ т
    • 1.5 Производња гаса
    • 1.6 Натријум тиосулфат и железов амонијум сулфат (производња сумпороводика)
  • 2 Припрема
  • 3 Усес
  • 4 Сеедед
  • 5 Ограничења
  • 6 Референце

Фоундатион

Свако од ових једињења испуњава функцију у медију.

Натријум хлорид и агар

Натријум хлорид је неопходан за одржавање осмотске равнотеже медија. Док агар даје чврсту конзистенцију.

ПХ индикатор (фенол црвени)

ПХ припремљеног медија је уравнотежен на 7,3 и пХ индикатор (фенол црвени) постаје жут испод 6,8. То значи да ће мале количине киселине настале ферментацијом шећера претворити медијум из црвено-наранџасте у жуту.

Ако се не догоди ферментација, долази до алкализације медија употребом пептона, претварајући се из црвено-наранџасте у јаку црвену.

Деривати протеина (екстракт квасца, екстракт меса, пептон и протеозни пептон)

Када бактерије метаболизирају протеине присутне у ТСИ агару, производе се амини који алкализирају медијум (углавном на нивоу конуса), јер реакција треба кисеоник. Амини окрећу маску на јаку црвену.

Али то ће зависити од способности бактерија да ферментирају угљене хидрате или не.

Ферментација угљених хидрата (глукоза, лактоза и сахароза)

Проучавање ферментације шећера може дати неколико слика и свака се различито интерпретира. Тумачење теста дели микроорганизме у 3 категорије: ферментори без глукозе, ферментори без лактозе и ферментори лактозе / сахарозе..

Треба напоменути да је количина глукозе у медијуму ограничена, док је концентрација лактозе и сахарозе 10 пута већа..

Бактерија породице Ентеробацтериацеае и други микроорганизми који ферментирају глукозу ће почети да ферментирају овај шећер јер је то најједноставнији угљикохидрат за енергију..

С друге стране, лактоза и сахароза су сложени угљикохидрати који се морају разградити и претворити у глукозу, тако да могу ући у Ембден-Меиерхоф циклус.

-Не ферментирајући микроорганизми глукозе

Када инокулисани микроорганизам није у стању да ферментира глукозу, много мање може да ферментира друге угљене хидрате. Због тога се овде не формирају киселине, али постоји формирање амина у косини због употребе пептона.

У овом случају, косина се претвара у јачу црвену боју и дно цеви може остати непромењено или се може алкализовати, остављајући целу црвену цев.

Тумачење: К / К означава алкалну косину / алкалну или неутралну позадину

На слици која се налази на почетку чланка види слику цеви Д.

Овај резултат указује да микроорганизам не припада породици Ентеробацтериацеае.

-Не-ферментирајући микроорганизми лактозе / сахарозе

Ако бактерије могу ферментисати глукозу, али не и лактозу или сахарозу, десиће се следеће:

Бактерија ће конзумирати сву присутну глукозу након отприлике 6 до 8 сати, јер ће моћи да закисели и косину и тацо; то јест, агар ће у потпуности постати жут. Али када се глукоза исцрпи и немогуће је користити лактозу и сахарозу, бактерије ће започети метаболизам протеина.

Овој реакцији је потребан кисеоник, па се деградација пептона дешава на површини (косина). Амини производе алкализирајућу маску окретањем жуте до црвене боје. Ова реакција је доказана у 18 до 24 сата инкубације.

Тумачење: К / А значи алкални конус и киселински тацо.

На слици која се налази на почетку чланка види слику цеви Б.

-Микроорганизми за ферментацију лактозе / сахарозе

Очигледно, микроорганизми способни за ферментацију лактозе и сахарозе могу ферментисати глукозу. Након што се исцрпи минимална количина глукозе присутне у медијуму, настали пируват почиње да се метаболизира да би формирао киселине кроз аеробни циклус Кребса, ау периоду од 8 до 12 сати сав медијум ће бити жут.

Ако је бактерија способна да раздвоји лактозу или сахарозу, киселине ће се наставити производити, а након 18 до 24 сата цеви - кљун и тацо - ће остати жуте.

Треба напоменути да се употреба глукозе врши на два начина: један у аеробној форми у косини цеви, а други анаеробно на дну епрувете..

Тумачење: А / А означава киселински конус / дно киселине. Може представити гас или не.

На слици која се налази на почетку чланка види слику цевчице А.

Производња гаса

Неки микроорганизми су способни да производе гас током ферментације шећера. Гас се показује у епрувети помоћу притиска који врши унутар агара. Притисак узрокује стварање мјехурића или помјерање агара. Понекад формирање гаса може да разбије медијум.

Важно је да се у тренутку засијавања ТСИ-ја бушење врши чистим средиштем агара све док не достигне дно. Ако се пробушење одвија према зидовима цеви, то може изазвати лажне позитивне резултате у производњи гаса, јер ће побећи кроз погрешно формиран канал.

Производња гаса, као и реакције које се дешавају у косини агара, захтевају кисеоник, па се препоручује да се епрувета прекрије памучним чепом, а ако се користи бакелитни поклопац, не би требало да буде потпуно подешен..

Производња плина се наводи као позитивна (+) или негативна (-).

Натријум тиосулфат и железов амонијум сулфат (производња водоник сулфида)

Бактерије које могу да производе водоник сулфид (безбојни гас), узимају сумпор натријум тиосулфата присутан у медијуму. Када се формира Х2С реагује са железовим амонијум сулфатом, производећи сулфид гвожђа (јасно видљив црни талог).

Производња Х2С је пријављено као позитивно (+) или негативно (-).

На слици која се налази на почетку чланка види слику цеви Ц.

Препаратион

Измерити 62,5 г дехидрираног агара троструког шећерног шећера (ТСИ) и растворити у једном литру дестиловане воде.

Загрејте док се агар потпуно не раствори. Кухајте на минуту и ​​често мешајте. Раздвојите 4 мл медијума у ​​13/100 епрувете са памучним поклопцем.

Стерилисати у аутоклаву на 121 ° Ц током 15 минута. Уклоните из аутоклава и оставите да се одмара на нагнут начин. Мора се водити рачуна да и база и оквир имају исту удаљеност.

Чувати у хладњаку 2-8 ° Ц. Оставите да се охлади пре садње бактеријског соја.

Боја дехидрираног медија је светло беж, а припремљена подлога је црвено-наранџаста

Коначни пХ припремљеног медија је 7,3 ± 0,2.

Усес

ТСИ тест се широко користи на нивоу микробиолошке лабораторије. Овај тест је од суштинског значаја за вођење врсте теста који се мора применити да би се дошло до идентификације рода и врста. Његово добро извршење и тумачење може спасити материјал и рад.

Ако је резултат ТСИ К / К и тест цитокром-оксидазе је позитиван, познато је да би се тестови требали користити за идентификацију не-ферментирајућих Грам негативних бацила, као што су Псеудомонас, Алцалиген, Ацхромобацтер, Буркхолдериа, између осталих родова. Ако је негативна оксидаза оријентисана према родовима Ацинетобацтер, Стенотропхомонас, итд..

С друге стране, ако се добије ТСИ А / А или К / А и тест цитокромоксидазе је негативан, што се више нитрата редукује на нитрите, имаћемо сигурност да је то микроорганизам који припада породици Ентеробацтериацеае. У овом случају, пут идентификације ће бити оријентисан на специфичне тестове за ову групу бактерија.

С друге стране, ако се добије К / А или А / А слика и тест цитокромоксидазе је позитиван, додатни тестови који ће бити постављени биће усмерени на идентификацију ферментационих сојева који не припадају породици Ентеробацтериацеае, као што су: Аеромонас, Плесиомонас, Вибрио и Пастеурелла.

ТСИ са сумпороводиком, негативном оксидазом, ће водити идентификацију следећих родова породице Ентеробацтериацеае: Протеус, Цитробацтер, Едвардсиелла, Леминорелла, Прагиа, Трабусиелла или Салмонелла.

ТСИ са оскудним или умјереним хидроген сулфидом у алкалној косини са алкалним дном и позитивном оксидазом ће водити употребу тестова за идентификацију грам-негативних, не-ферментирајућих бацила који производе Х2С, као што је Схеванелла путрефациенс.

Коначно, ТСИ се може користити за истраживање производње сумпороводика у грам-позитивним бацилима, посебно када се сумња Ерисипелотхрик рхусиопатхиае.

Совн

ТСИ медијум мора бити инокулисан чистим колонијама, изолованим у примарним или селективним културама. Ако се колонија узме из селективних медија који су засијани узорцима са мешаном флором, треба водити рачуна да се узме само површина, јер у доњем делу колоније могу бити одрживи сојеви инхибирани у том средству..

Због тога се петља никада не сме хладити у селективном медијуму да би се онда узела колонија и инокулисала ТСИ медијум.

Садња ће бити обављена равном петљом или иглом. Направиће се бушење, водећи рачуна да буде кроз средину средине док не доспије до дна, а затим се садња заврши инокулацијом површине цик-цак начин. Не радите два пункција.

Инкубирајте на 37 ° Ц у аеробиози 18-24 сата. Интерпретирајте у овом тренутку, ни пре, ни после.

Ограничења

Тест ТСИ треба да се очитава између 18 до 24 часа инкубације. Читање прије овог времена може дати лажно позитиван резултат ферментације А / А. Док, читање после овог времена, може довести до лажне негативне слике не-ферментора, због потрошње пептона који алкализују медијум.

Референце

  1. Мац Фаддин Ј. (2003). Биохемијски тестови за идентификацију бактерија од клиничког значаја. 3рд ед. Едиториал Панамерицана. Буенос Аирес Аргентина.
  2. Форбес Б, Сахм Д, Веиссфелд А. (2009). Микробиолошка дијагностика Баилеи & Сцотт. 12 ед. Едиториал Панамерицана С.А. Аргентина.
  3. Конеман Е, Аллен С, Јанда В, Сцхрецкенбергер П, Винн В. (2004). Микробиолошка дијагноза. 5тх ед. Едиториал Панамерицана С.А. Аргентина.
  4. "ТСИ агар." Википедиа, Тхе фрее енцицлопедиа. 10 Јул 2018, 08:09 УТЦ. Феб 10 2019, 03:33 Доступно на: ен.википедиа.орг
  5. Лабораториес Британиа. ТСИ Агар (троструки шећерни агар). 2015. Доступно на: британиалаб.цом
  6. БД Лабораториес Троструки шећерни агар (ТСИ Агар). 2003. Доступно на: бд.цом