Агар Тхаиер Мартин темељ, припрема и употреба



Тхе Тхаиер Мартин агар То је веома хранљива и селективна чврста подлога за изолацију Неиссериа менингитидис и Неиссериа гоноррхоеае; познате као патогене или клинички значајне Неиссериа.

Једна од најважнијих посебности Тхаиер Мартин агара је његов висок садржај нутритивних додатака. Ово својство је неопходно, јер су Неиссериас веома захтевни микроорганизми са нутритивне тачке гледишта и стога не расту у заједничким медијима..

С друге стране, пошто се ови микроорганизми нормално налазе у нестерилним подручјима, неопходно је додавање инхибитора који спречавају раст пратеће флоре, без утицаја на развој рода Неиссериа..

Овај агар се састоји од ГЦ базног агара, хемоглобина, додатних додатака исхрани и комплекса инхибиторних супстанци (антибиотика и антифунгала). Комерцијалне куће продају сваки од додатака одвојено.

Узорак који ће се садити у овом медију зависи од траженог микроорганизма. То Неиссериа гоноррхоеае Идеални узорци су вагинални и уретрални секрети. Док за Неиссериа менингитидис најчешће коришћени узорци су ЦСФ, фарингеални и назофарингеални ексудати.

Индек

  • 1 Фоундатион
    • 1,1 ГЦ базни агар
    • 1.2 Хемоглобин
    • 1.3 Допуна за обогаћивање
    • 1.4 Инхибитори
  • 2 Припрема
    • 2.1 Оригинални Тхаиер Мартин Агар
    • 2.2 Агар Тхаиер Мартин је измењен
  • 3 Користите
  • 4 Контрола квалитета
  • 5 Ограничења
  • 6 Референце

Фоундатион

Неиссериас су микроорганизми класификовани као досадни и стога је њихова изолација тешка. Из тог разлога, Тхаиер Мартин је комплексан медиј и свака од његових компоненти испуњава функцију која је објашњена у наставку:

ГЦ језгра агар

ГЦ агар садржи протеозни пептон, кукурузни скроб, натријум-хлорид, дикалијум-фосфат, монокалијум-фосфат и агар-агар. Његове компоненте обезбеђују основне хранљиве састојке за развој микроорганизама, неутралишу токсичне масне киселине, доприносе одржавању осмотске равнотеже, дефинишу пХ и обезбеђују чврсту конзистенцију околине.

Хемоглобин

Хемоглобин обезбеђује факторе В и Кс (никотинамид аденин динуклеотид НАД и хемин). Због тога у овој средини расте и врста Хаемопхилус. Хемоглобин се може комерцијално добити у дехидрираној форми или у медијум може се додати свјежа дефибринирана крв говеда..

Допуна за обогаћивање

С друге стране, додатак за обогаћивање мора бити додат у Тхаиер-Мартин медијуму, јер хранљиве материје садржане у базном агару нису довољне за потребе рода Неиссериа..

Најчешће коришћени додатак за обогаћивање се назива исовиталек. Садржи глутамин, аденин, НАД, кокарбоксилазу, гванин, фери нитрат, п-амино бензоичну киселину, витамин Б12, тиамин и глукозу. Сва ова једињења су неопходна за правилан развој патогене Неиссериа.

Инхибиторс

Будући да се ради о високо храњивој подлози, морају се користити инхибитори да би се спријечио раст микроорганизама уобичајене флоре тог подручја и тиме фаворизирала изолација рода Неиссериа..

Комплекс инхибитора састоји се од ванкомицина, колистина и нистатина. Ванкомицин инхибира раст Грам-позитивних бактерија, колистин спречава развој Грам-негативних бактерија као што су Псеудомонас и неке сапрофитне Неиссериа, а нистатин делује на квасце као Цандида албицанс.

Међутим, затим је Тхаиер Мартин агар модификован; промене су се састојале од додавања триметоприма, повећања количине агара и додавања екстра глукозе. Ове промене су значајно побољшале опоравак врста Неиссериа гоноррхоеае.

Треба напоменути да триметоприм инхибира раст рода Протеус и његово последично формирање ројења. У том смислу, антибиотици су оно што даје селективну природу медију Тхаиер Мартин.

Препаратион

Оригинални Тхаиер Мартин Агар

-ГЦ Агар

Измерити 8,2 г дехидрираног ГЦ медија и суспендовати у 100 мл. Мешати и прокувати 1 минут са честим мешањем да би се растворио у целости. Смешу стерилисати у аутоклаву на 121 ° Ц током 15 минута.

-2% хемоглобина

2 г дехидрираног хемоглобина суспендовати у 2 или 3 мл вруће дестиловане воде како би се добила униформна смеша. Додајте мало по мало више воде да попуните запремину од 100 мл. Суспензија мора бити хомогена пре стерилизације.

Стерилисати у аутоклаву 15 минута.

-Допуна за обогаћивање

Реконструисати комерцијални пут са средством за разређивање које је обезбедила иста комерцијална кућа. Добро промешајте. Количина средства за разређивање која ће се користити ће бити наведена у упутствима за комплет..

-Додатак инхибиције В.Ц.Н (ванкомицин, колистин, нистатин)

Реконституисати бочицу са средством за разређивање које обезбеђује комерцијална кућа. Добро промешајте. Количина средства за разређивање која ће се користити ће бити наведена у упутствима за комплет..

-Припремљен

На сваких 100 мл ГЦ агара поступите на следећи начин:

Када ГЦ агар напусти аутоклав, оставите да се охлади на температуру од приближно 50 ° Ц и додајте 2 мл припремљеног раствора хемоглобина, 2 мл додатка за обогаћивање (исобиталек или бриталек) и 2 мл додатка за инхибицију. Помешајте и послужите у стерилним Петријевим посудама.

Пустите да се скрутне и чувати у фрижидеру до употребе.

Боја припремљеног медија је црвена трешња. Крајњи пХ медијума је 7.2 ± 0.2

Модификован Агер Тхаиер Мартин

Измерити 8,2 г дехидрираног ГЦ медија и суспендовати у 100 мл. Додати 1 г агара и додати 0,3 г глукозе. Мешати и прокувати 1 минут са честим мешањем да би се растворио у целости. Смешу стерилисати у аутоклаву на 121 ° Ц током 15 минута.

Припремите хемоглобин и додатак за обогаћивање како је горе описано.

Додатак инхибиције је В.Ц.Н.Т (ванкомицин, колистин, нистатин, триметоприм).

-Припремљен

Наставите као што је описано за оригинални Тхаиер Мартин агар.

Усе

Таиер Мартин агар треба да се ублажи пре сејања узорака. Уобичајено кориштени узорци су фарингеални ексудати, назални ексудати, вагинална, уретрална и / или ректална секреција и ЦСФ..

Користите свеже узете узорке и направите јак инокул на агару. Узорци се сијају директно изливом материјала, а затим се испуштају на површину.

Плоче се инкубирају на 35-37 ° Ц током 24 до 48 сати у микроаерофилној тегли (5% ЦО2). На крају периода инкубације, плоче се испитују за мале, сиве и понекад колоније сличне мукоиду..

Извести Грам и потврдне биохемијске тестове на сумњиве колоније.

Контрола квалитета

Да би се извршила контрола квалитета Тхаиер Мартин агара, могу се користити следећи микробни сојеви.

Неиссериа гоноррхоеае АТЦЦ 49226 анд Неиссериа менингитидис АТЦЦ 13090; у оба соја очекује се задовољавајући развој.

Следећи сојеви такође треба да буду укључени: Стапхилоцоццус епидермидис АТЦЦ 14990, Есцхерицхиа цоли АТЦЦ 25922, Протеус мирабилис АТЦЦ 43071 и Цандида албицанс АТЦЦ 10231. У свим њима се очекује потпуно или дјелимично инхибирање у овом медију.

Ограничења

-Мора се имати на уму да бактерије које су отпорне на кориштене инхибиторе могу расти у медију..

-Постоје сојеви Неиссериа гоноррхоеае који могу бити осетљиви на концентрацију ванкомицина. Из тог разлога препоручује се да се паралелно користи чоколадни агар допуњен исовиталексом, али без инхибитора.

-Постоје сојеви квасаца резистентни на нистатин који могу расти у овом медију и ометати изолацију патогених Неиссериа, посебно гонокока..

Референце

  1. Валтек дијагностичке лабораторије. Агар Тхаиер-Мартин. Доступно у: цом
  2. Лабораториес Британиа. Тхаиер Мартин Модификован медијум. 2010. Доступно на: британиалаб.цом
  3. Википедиа цонтрибуторс. Тхаиер-Мартин агар. Википедиа, Тхе Фрее Енцицлопедиа. 26. октобар 2017., 16:33 УТЦ. Доступно на: википедиа.орг4. Приступљено 28. фебруара 2019. године.
  4. Лабораториес Британиа. ГЦ агар. 2010. Доступно на: британиалаб.цом.
  5. Лабораторије ББЛ ™ Средње обогаћивање за брзе микроорганизме. 1999. Доступно на: бд.цом
  6. Форбес Б, Сахм Д, Веиссфелд А. (2009). Микробиолошка дијагностика Баилеи & Сцотт. 12 ед. Едиториал Панамерицана С.А. Аргентина.