Објави:
Агар Сабоурауд темељ, припрема и употреба
Тхе Сабоурауд агар, Такође познат као Сабоурауд декстрозни агар, то је чврсти медијум културе, посебно обогаћен за изолацију и развој гљива, као што су квасци, плијесни и дерматофити..
Стога, ово средство не може недостајати у микробиолошкој лабораторији за испитивање присуства патогених или опортунистичких гљива, било из клиничких или неклиничких узорака. Исто тако, она је такође идеална за раст филаментозних бактерија као што су Стрептомицес и Ноцардиа. Његова употреба је веома широка, може се користити у људској, животињској, биљној и индустријској микологији.
Овај медиј настао је 1896. године од стране реномираног дерматолога Раимонда Сабоурауда, који је постао свјетски познати стручњак за поремећаје власишта, углавном узрокованих дерматофитима..
Његово стварање је било толико важно да се од тада користи и наставља се и данас, иако са неким измјенама.
Иако је то посебно за гљиве, у овој средини бактерије могу расти, па за узорке са мешаном флором потребно је укључити антибиотике у њихову припрему и тако инхибирати раст бактеријске флоре која може бити присутна.
Избор антибиотика треба да се врши пажљиво и узимајући у обзир тип гљивица које желите да опоравите, јер су неке инхибиране у присуству одређених супстанци..
Индек
- 1 Фоундатион
- 1.1 Најчешће коришћене комбинације Сабоурауд декстрозног агара са антибиотицима
- 2 Припрема
- 2.1 Декстроза Сабоурауд Агар
- 2.2 Сабоурауд декстроза агар (модификација емона)
- 2.3 Сабоурауд декстрозни агар (модификација Еммонс-а) са хлорамфениколом
- 2.4 Декстроза Сабоурауд Еммонс агар са циклохексимидом
- 2.5 Декстроза Сабоурауд Агар (Еммонс) са хлорамфениколом и циклохексимидом
- 2.6 Остали антибиотици који се могу додати
- 3 Посебна разматрања
- 4 Контрола квалитета
- 5 Усес
- 5.1 Примарна култивација
- 5.2 Спорулација
- 5.3 Очување
- 5.4 Микрокултура
- 5.5 У људској микологији
- 5.6 Животињска микологија
- 5.7 Еколошка микологија
- 5.8 Индустријска микологија
- 5.9
- 6 Референце
Фоундатион
Сабоурауд декстрозни агар је медијум који је у својој оригиналној формулацији слабо селективан, због свог киселог пХ од 5,6 ± 0,2, међутим бактерија се још увек може развити, углавном у продуженим инкубацијама..
Медиј садржи казеин пептон и пробављено ткиво панкреаса, које обезбеђују извор угљеника и азота за развој микроорганизама..
Такође садржи високу концентрацију глукозе, која делује као извор енергије, фаворизујући раст гљивица над бактеријама. Све је помешано са агар-агар, компонентом која обезбеђује праву конзистенцију.
Са друге стране, Сабоурауд декстрозни агар може бити селективан ако се додају антибиотици.
Код антибиотика је посебно корисно у узорцима рана, отвореним чиревима или било ком узорку у којем се сумња на велику бактеријску контаминацију.
Најчешће су коришћене комбинације Сабоурауд декстрозног агара са антибиотицима
-Сабоурауд агар са хлорамфениколом: идеалан за опоравак квасаца и филаментозних гљива.
-Сабоурауд агар са гентамицином и хлорамфениколом: у овом медију расту скоро све филаментозне гљивице и квасац, и инхибира велики број бактерија, укључујући Ентеробактерије, Псеудомонас и Стапхилоцоццус \ т.
-Сабоурауд агар са циклохексимидом: посебно је користан за узорке са коже или респираторног тракта, све док постоји сумња на диморфне гљиве.
Циклохексимид треба користити опрезно; Иако се користи да инхибира раст непатогених или еколошких гљива и квасаца који могу бити присутни као контаминанти у узорку, он такође инхибира раст неких гљива као што је Цриптоцоццус неоформанс, Аспергиллус фумигатус, Аллесцхериа боидии, Пенициллиум сп анд друге опортунистичке гљиве.
-Сабоурауд агар са хлорамфениколом плус циклохексимидом: користи се углавном за изолацију диморфних дерматофита и гљивица. Недостатак је да инхибира неке врсте опортунистичких гљива Цандида но албицанс, Аспергиллус, Зигомицетес или Ц. неоформанс.
-Сабоурауд агар са хлорамфениколом, стрептомицином, пеницилином Г и циклохексимидом: идеалан је за узорке изузетно контаминиране бактеријама и сапрофитним гљивама, али има недостатак да инхибира раст Ацтиномицес и Ноцардиас, поред опортунистичких гљива поменутих горе.
Препаратион
Ако имате састојке одвојено, можете их припремити на следећи начин:
Декстрозни агар Сабоурауд
Вагање:
- 40 гр декстрозе
- 10 г пептона
- 15 гр агар-агара
- Измерити 1000 мл дестиловане воде
Сви састојци су помешани, пХ је подешен на 5.6. Растворити растворима кључањем, распоредити 20 мл медија у епруветама од 25 к 150 мм, без прирубнице и са памучним врхом пожељно.
Могу се користити и друге величине цијеви, овисно о расположивости.
Они се аутоклавирају 10 минута у атмосфери под притиском (121 ° Ц). Не прелазите време аутоклавирања. Када напусте аутоклав, епрувете се нагињу са ослонцем док се не стврдну у врху флауте..
Други начин је да растворите састојке загријавањем док не прокључа. У истом аутоклаву фиола 10 минута и затим дистрибуирати 20 мл у Петријеве посуде.
Ако је на располагању Сабоурауд медијум за декстрозни агар, који већ садржи све састојке, настављамо са мерењем количине коју одређује комерцијална кућа за један литар воде. Остали кораци су исти као они описани горе.
Декстроза агар Сабоурауд (модификација Емонса)
Вагање:
- 20 гр декстрозе
- 10 г пептона
- 17 гр агар-агара
- Измерити 1000 мл дестиловане воде
Сви састојци су помешани, пХ је подешен на 6,9. Наставите на исти начин као у претходном случају.
Постоје комерцијалне куће које нуде медиј са свим састојцима. У том случају измерите и припремите како је описано у уметку.
Сабоурауд декстрозни агар (модификација Еммонс-а) са хлорамфениколом
Основни раствор хлорамфеникола
- Измерити 500 мг базе хлорамфеникола
- Измерити 100 мл 95% етанола
- Мик
Сабоурауд медијум за декстрозни агар (Еммонс) је припремљен као што је горе описано и, додатно, за сваки литар медијума, додати 10 мл хлорамфениколовог раствора пре аутоклавирања..
Декстрозни агар Сабоурауд Еммонс са циклохексимидом
Основни раствор циклохексимида
- Измерити 5 гр циклохексимида
- Измерити 100 мл ацетона
- Мик
Сабоурауд средина декстрозног агара (Еммонс) је припремљена као што је већ описано и додатно за сваки литар медијума додајте 10 мл основног раствора циклохексимида пре аутоклавирања.
Сабоурауд декстрозни агар (Еммонс) са хлорамфениколом и циклохексимидом
Сабоурауд средина декстрозног агара (Еммонс) је припремљена као што је горе описано и додатно за сваки литар медијума додати 10 мл хлорамфениколовог растворног раствора и 10 мл циклохексимидног основног раствора пре аутоклавирања.
Остали антибиотици који се могу додати
20.000 до 60.000 јединица пеницилина по литру медијума.
30 мг стрептомицина по литру медијума.
Оба треба да се уграде након аутоклавирања медија, благо охлађеног (50-55 ° Ц).
0,04 г неомицина по литру медијума.
0,04 г гентамицина по литру медијума.
Посебна разматрања
Ради безбедности пожељно је да се Сабоурауд декстрозни агар посади у клинастим епруветама (нагнутим у врх пиринча), а не у Петријевим посудама, да би се избегла дисперзија и инхалација спора..
Важно је да цеви са Сабоурауд агаром буду покривене памуком, а не са навојном капом, јер је показано да семианаеробни услови спречавају формирање спора у неким сојевима, на пример Цоццидиоидес иммитис. Поред тога, већина гљивица је аеробна.
Ако користите навојну капу, немојте је затворити.
Контрола квалитета
Припремљени медији морају имати контролу квалитета како би потврдили њихово правилно функционисање. У ту сврху се сијају одређени контролни сојеви.
За Сабоурауд декстрозни агар са хлорамфениколом могу се користити АТЦЦ сојеви. Цандида албицанс, који мора имати одличан раст. Друга плоча се инокулира са сојевима Есцхерицхиа цоли, мора бити потпуно инхибиран.
Неинокулирана плоча се инкубира у којој микроорганизам не смије расти.
Сабоурауд декстроза агар са хлорамфениколом и циклохексимидом могу се користити сојеви Трицхопхитон ментагропхитес, морају се добро развијати. Друга плоча се инокулира са сојем Аспергиллус флавус, у којима мора постојати мали раст или раст. Додатно, неинокулирана плоча се инкубира да би се показала његова стерилност.
За Сабоурауд декстрозни агар са циклохексимидом, сојеви Цандида албицанс, Трицхопхитон рубрум о Мицроспорум цанис, што би требало да покаже добар раст.
Исто тако, сој Аспергиллус флавус, показује оскудни раст или раст. Коначно инкубирајте неинокулирану плочу за контролу стерилности.
Усес
Примарна култивација
Класични Сабоурауд декстрозни агар садржи 4 грама декстрозе и одличан је као примарни медиј за изолацију, јер показује карактеристичну морфологију сваке гљивице..
Такође је одличан за демонстрацију производње пигмената. Међутим, није најприкладније средство за посматрање спорулације.
Такође се не препоручује да расте Бластомицес дерматитидис, који је инхибиран високом концентрацијом присутне глукозе.
С друге стране, за култивацију се морају имати на уму одређена разматрања.
Неке се гљивице боље развијају на собној температури, као што су плијесни, друге се успјешно развијају на 37 ° Ц, попут неких квасаца, а друге се могу развити на обје температуре (диморфне гљиве).
Из тог разлога, понекад је неопходно користити неколико Сабоурауд агар плоча за исти узорак, јер су често посађене у дупликату да би инкубирале једну плочу на собној температури и другу плочу на 37 ° Ц..
На пример, Споротхрик сцхенцкии сије се у двије плоче; један се инкубира на собној температури да би се добила фаза калупа, а друга се инкубира на 37 ° Ц да би се добила фаза слична квасцу, али у последњем је потребно додати 5% крви у медијум.
У другим случајевима, као у узорцима микетета, сије се двије плоче Сабоурауд агара, једна с клорамфениколом, а друга с циклохексимидом. Први ће омогућити раст узрочника микетома гљивичног порекла (Еумицетома) и другог узрочника микетета бактеријског порекла, као што су актиномицетом..
Спорулација
Декстроза Сабоурауд агар модификован од стране Еммонс-а садржи 2 грама декстрозе и не користи се само за изолацију, већ и за спорулацију и конзервацију гљива..
У овом медију, ако можете опоравити сојеве Бластомицес дерматитидис.
Цонсерватион
Да би се очувале гљивичне културе, могу се чувати у фрижидеру (2-8 ° Ц). Време складиштења може да варира између 2 и 8 недеља. После овог времена морају бити субкултивисани да би се процес поновио.
Неке гљиве се најбоље одржавају на собној температури, као што је Епидермопхитон фоццосум, Трицхопхитон сцхоенлеиннии, Т. виолацеум и Мицроспорум аудоунии.
Одржавање соја може се продужити да би се избегао плеоморфизам ако се декстроза потпуно уклони из агара и ако се количина агара у медијуму смањи да се избегне сувоћа.
Мицроцултурес
За идентификацију неких филаментозних гљива неопходно је спровести микрокултуру користећи Сабоурауд агар или друга специјална средства за посматрање структура сексуалне и асексуалне репродукције..
У људској микологији
Користи се углавном за дијагнозу гљивичних обољења, посебно оних који утичу на кожу и њене везаности (коса и нокти)..
Узорци могу бити секрети, ексудати, кожа, коса, нокти, спутум, ЦСФ или урин. Патогени који су обично изоловани су дерматофити, гљивице које изазивају субкутане и системске гљивичне инфекције.
Анимал мицологи
Животиње су често погођене гљивичним инфекцијама, тако да је Сабоурауд агар користан у животињама као иу хуманој микологији..
На пример, дерматофити могу често да утичу на животиње. Такав је случај Мицроспорум цанис вар, који често инфицирају псе, мачке, коње, свиње и мајмуне. Исто тако, Мицроспорум гипсеум инфицира псе, мачке и стоку.
Птице као што су кокоши, пијетлови и кокоши су погођене Мицроспорум галлинае.
Остале печурке, као Зимонема фарциминосум, такође су узрок болести код животиња, углавном код коња, мула и магараца, што доводи до значајне упале лимфних судова.
Споротхрик сцхенкии и Хистопласма цапсулатум утичу на домаће и људске животиње.
Енвиронментал мицологи
Многе патогене или опортунистичке гљиве могу бити концентрисане у било ком тренутку у датој средини, посебно у операционим салама и јединицама интензивне неге (ИЦУ) клиника и болница. Због тога је неопходно контролисати их.
Други рањиви простори су библиотеке и старе зграде, на које може утицати концентрација еколошких гљива.
У студијама о животној средини Сабоурауд декстрозни агар се користи за изолацију гљива.
Индустриал мицологи
Сабоурауд декстрозни агар не може да недостаје за проучавање загађивача гљивица у производњи козметике, хране, пића, коже, текстила, између осталог.
Плант мицологи
Биљке такође пате од болести изазваних гљивама, које погађају различите делове биљке, што чак може да оконча жетву, изазивајући велике губитке у пољопривреди..
Референце
- Цуенца М, Гадеа И, Мартин Е, Пеман Ј, Понтон Ј, Родригуез (2006). Микробиолошка дијагностика микоза и студије осјетљивости на антифунгале. Препоруке Шпанског друштва за инфективне болести и клиничку микробиологију. Доступно на: цоесант-сеимц.орг
- ВалтеК Лаборатори. (2009). Сабоурауд декстрозни агар са циклохексимидом. Доступно на: андинамедица.цом.
- Наварро О. (2013). Ветеринарска микологија. Национални аграрни универзитет. Никарагва.
- Форбес Б, Сахм Д, Веиссфелд А. 2009. Микробиолошка дијагностика Баилеи & Сцотт. 12 ед. Аргентина Панамерицана С.А Уводник
- Цасас-Ринцон Г. Генерална микологија. 1994. 2. Ед Универсидад Централ де Венезуела, издања библиотеке. Венецуела, Царацас.