Темељ папа декстрозе, припрема и употреба

Тхе папа декстроза агар то је чврста, неселективна хранљива подлога за културу. Може расти бактеријске и гљивичне врсте, али је његова употреба посебно назначена за изолацију филаментозних гљива и квасаца. Познат је и као ПДА медијум на енглеском изразу Потато Дектросе Агар.

Посебно је корисна за изолацију фитопатогених гљива, односно оних које погађају биљке. Да би се узели узорци из заражених биљака, могу се користити други медији, као што је Сабоурауд агар или малта агар, међутим, за рутинску употребу, предност се даје декстрозном агару кромпира због веће спорулације..

Користи се и за бројање гљивичних колонија у узорцима козметике, фармацеутских производа и неких млечних производа. Исто тако, погодно је да се узму узорци остатака коже у потрази за дерматофитима, који веома добро расту у овом медију, развијајући њихове карактеристичне пигменте.

Средство за декстрозу кромпира је веома једноставно и лако се припрема у лабораторији. Садржи, као што име каже, инфузију кромпира, декстрозу и агар-агар. Додатно, инхибиторне супстанце се могу додати да би се спречио раст бактерија и повећала селективност за врсте гљивица.

Индек

• 1 Фоундатион
• 2 Припрема
  • 2.1 - Домаћа (некомерцијална) припрема папа декстрозног агара
  • 2.2 - Комерцијална припрема папа декстрозног агара
• 3 Усес
  • 3.1 Процес за садњу биљних узорака на декстрозном агару кромпира
  • 3.2 Процес за садњу узорака коже, косе или љусака за нокте на папи декстрозном агару
  • 3.3 Поступак идентификације
  • 3.4 Број колонија
  • 3.5 Одржавање гљивичних сојева
• 4 Контрола квалитета
• 5 Референце

Фоундатион

Папа декстроза агар је медијум културе који обезбеђује неопходне нутритивне елементе за развој филаментозних гљивица и квасаца.

Комбинација инфузије кромпира са глукозом пружа савршен извор енергије за задовољавајући раст гљивица. Док је агар онај који обезбеђује конзистентност околине.

Сам медиј не инхибира раст бактерија, па је то неселективни медијум. Да би била селективна, потребно је додавање инхибиторних супстанци као што је винска киселина или антибиотици.

Препаратион

-Домаћа (некомерцијална) припрема декстрозног агара од кромпира

Петријева посуда

Припрема се на следећи начин:

Пре свега, кромпир се добро опере, уклањајући прљавштину коју имају. Нарезују се на танке кришке са свиме и љуском. 200 г кромпира се измери и стави да се кува у литри дестиловане воде пола сата.

Након времена се филтрира или затегне сав препарат кроз газу.

Добијена течност се заврши дестилованом водом све док не достигне један литар. У инфузију је додато 20 г агар-агара и 20 г декстрозе, добро измешано и аутоклавирано на 121 ° Ц, на 15 фунти притиска током 15 минута..

Оставити да се охлади на 50 ° Ц и послужити у стерилним Петријевим посудама. Припремљене плоче се чувају у фрижидеру.

Ведгес

Такође се могу припремити папагајски декстрозни агар.

У овом случају, пре стерилизације у аутоклаву, 12 до 15 мл медијума се стављају у епрувете, затим се аутоклавирају и након остављања леже на специјалним подлогама док се не очврсне. Уштедите у фрижидеру.

Медиј остаје на пХ 5,6 ± 0,2, међутим, неке лабораторије додају 10% винске киселине како би се пХ смањио на 3,1 ± 0,1 како би инхибирали раст бактерија..

У том истом смислу, друге лабораторије преферирају да додају антибиотике како би га селективно за узгој гљива и спријечили развој бактерија..

-Комерцијална припрема декстрозног агара кромпира

Измерити 39 г комерцијално доступног дехидрираног медијума и растворити у једном литру дестиловане воде. Оставите у мировању 5 минута.

Мешавина се загрева често до потпуног растварања. Затим стерилисати у аутоклаву на 121 ° Ц током 15 минута.

Могу се припремити плоче или клинови. Наставите као што је горе описано.

ПХ остаје на 5.6 ± 0.2. Ако је пХ 3,1 пожељан, треба додати 14 мл 20% стерилне винске киселине пре сервирања на плоче..

Боја неприпремљеног медија је беж и припремљена је свијетло јантараста са благо мутним или опалесцентним изгледом.

Усес

Процес за садњу биљних узорака у декстрозном агару кромпира

-За лишће са мрљама

Листови се режу на комаде.

У стаклу од 50 цм са 50% алкохола, ставите делове лишћа (обојене и здраве) да бисте површину дезинфиковали 20 до 30 секунди. Повуците алкохол и додајте 20% натријум хипохлорита 40 до 50 секунди ако су танки и повећајте време на 80 секунди ако је кора и трупци.

Повуците натријум хипохлорит и узмите стерилним клипом дезинфициране комаде и ставите их на површину медија (максимално 10 комада). Ставите датум и инкубирајте од 20 до 30 ° Ц.

-За воће и кртоле

Ако је плод меснат, отворите плод који је захваћен гљивама и узмите комаде са стерилним скалпелом, и оболели део и здрав део и ставите га на површину агара..

Ако је воће цитрусно, као што је лимун или наранџа, треба да отворите и посадите семе.

Када је површина плода захваћена, а споре уочене, најбоље је да се на плочи употреби гратед метода; ово се састоји од додиривања спора лопатицом у облику "Л" стерилизираног и охлађеног, а затим извести цик-цак сијање 2 до 3 пута на агару.

-За житарице

Дезинфикују се како је описано у листовима, а затим стављају на агар.

-За гране и стабљике

Изводи се стругање коре, а затим се узимају комади здравог и болесног дела и сијају директно на агар..

Засијане плоче се инкубирају у аеробиози на 20-30 ° Ц током 72 сата.

Процес за садњу узорака коже, косе или љусака за нокте на папи декстрозном агару

Узорак се мора узимати помоћу оштрице скалпела бр. 11, било да се изрезује погођена коса, пахуљице коже или нокти у потрази за дерматофитима. Пре узимања узорка, подручје треба дезинфицирати са 70% алкохола.

-Скин сампле

Код сцали лезија, ивица лезије треба да се оструже, јер постоји већа вероватноћа да се пронађе гљивица.

У ексудативним лезијама узорак се узима сувим или влажним обриском. Сијте одмах на декстрозни агар кромпира или Сабоурауд агар. Избегавајте превозна средства.

Друга метода узорковања је квадратна техника тепиха Мариата и Адана Цампоса. У том случају захваћено подручје се утрљава 5 пута са комадом стерилне вуне за даљу култивацију.

Узорак се може ставити директно у медијум за културу.

-Хаир сампле

У зависности од патологије, захваћени део може бити одсечен или одсечен од корена. Ставите узорак у медијум за културу.

-Фингернаил сампле

Можете остругати или изрезати одређени део захваћеног нокта. То ће зависити од врсте повреде.

Пререзати узорак на комаде од 1 мм пре сетве како би се повећала вероватноћа контакта гљивице са медијумом културе..

Поступак идентификације

Колоније добијене на плочи се изолују у епрувете које садрже агар декстрозе кромпира да би се извршила макроскопска студија колонија (изглед, боја, конзистенција, степен развоја)..

Микроскопска студија (посматрање структура и њихових формација), може се вршити микрокултуром или директним посматрањем под микроскопом између ламина и ламела.

Број колонија

Овај медијум се такође може користити за одређивање оптерећења гљивица и квасаца присутних у биљним узорцима, храни, козметици или лековима. У ту сврху користи се папа декстроза агар допуњен антибиотицима, као што су: (хлорамфеникол, хлоротетрациклин или оба).

Сипати 1 мл узорка - по могућности разблаженог - у стерилну и празну Петријеву посуду, затим растопити чеп од декстрозе агар кромпира и оставити да се охлади на 45 ° Ц. Прелијте петријеву здјелицу и ротирајте док се не хомогенизира. Оставите га на миру док се не учврсти.

Инкубирајте у аеробиози на 20-25 ° Ц (калупи) или на 30-32 ° Ц (квасац) 5 до 7 дана или више, у зависности од врсте гљиве коју тражите и врсте узорка. Двије плоче се могу користити за инкубацију у оба температурна подручја.

Одржавање гљивичних сојева

Папа декстрозни агар се може користити за одржавање одрживих гљивичних сојева неколико година.

Да би се то постигло, гљива се узгаја у папагама декстрозног агара и једном када се гљива узгаја, покрива се минералним уљем. Уље се мора стерилисати у аутоклаву 45 минута, и имати приближну вискозност од 300 до 330 Саиболт. Уље би требало да пређе конични врх од 1 до 2 цм.

Контрола квалитета

Из сваке припремљене шарже треба узети једну или две плоче и инкубирати на 25 ° Ц током 48 сати или на 20 ° Ц током 96 сати. Добра контрола стерилности је она у којој нема развоја колонија.

Такође познати или сертификовани контролни сојеви као што су:

Саццхаромицес церевисиае АТЦЦ 9763, Цандида албицанс АТЦЦ 10231, Аспергиллус брасилиенсис АТЦЦ 16404, Трицхопхитон ментагропхитес АТЦЦ 9533. У свим случајевима очекује се добар раст.

Референце

1. Лабораториес Британиа. Папа глуцосадо агар. 2015. Доступно на: британиалаб.цом
2. Неоген Лабораториес Кромпиров декстроза агар. Доступно на: фоодсафети.неоген.цом
3. Инсумолаб Лаборатори Кромпирни декстрозни агар. Доступно на: инсумолаб.цл
4. Форбес Б, Сахм Д, Веиссфелд А. (2009). Микробиолошка дијагностика Баилеи & Сцотт. 12 ед. Едиториал Панамерицана С.А. Аргентина.
5. Цасас-Ринцон Г. Генерална микологија. 1994. 2. Ед Универсидад Централ де Венезуела, издања библиотеке. Венецуела, Царацас.
6. Ацеитуно М. Процјена микробиолошке каквоће у сјенилу за очи, компактни тип праха у националној производној лабораторији, према референтној методи фармакопеје 2005. Теза да се квалификује за титулу фармацеутског хемичара. Универзитет Сан Царлос де Гуатемала.
7. Цуетара М. Обрада површинских узорака. Ибероамерицан Мицологи Магазине. 2007; пп. 1-12