Агар Муеллер Хинтон фондација, припрема и употреба

Тхе Муеллер Хинтон агар То је чврста, неселективна хранљива подлога која се састоји од инфузије меса, пептон казеина, шкроба, агара и дестиловане воде. Овај медијум омогућава одличан микробни развој најбрже растућих бактерија.

Првобитно су га створили Јохн Ховард Муеллер и Јане Хинтон како би изоловали храњиво захтјевне бактерије, као што су Неиссериа гоноррхоеае и Неиссериа менингитидис. Међутим, показало се да је због својих карактеристика идеалан за проучавање подложности антибиотицима, пружајући поуздане и репродуктивне резултате.

Из тог разлога, Муеллер Хинтон агар је медијум културе који су прихватили Институт за клиничке и лабораторијске стандарде (ЦЛСИ) и Европски комитет за тестирање антимикробне осетљивости, за спровођење теста осетљивости на антибиотике методом Кирби диск дифузије. Бауер.

Индек

• 1 Фоундатион
• 2 Припрема
• 3 Усес
  • 3.1 Антимикробна техника
  • 3.2 Стратешко постављање дискова на агару Муеллер Хинтон
• 4 Узроци погрешних резултата
• 5 Ограничење
• 6 Контрола квалитета
• 7 Референце

Фоундатион

Пошто је то неселективна хранљива подлога, одлична је за раст већине патогених бактерија.

С друге стране, његова једноставна композиција чини супстанце лако дифузним на њој, што је битна карактеристика теста осетљивости диск дифузионим методом..

Још једна од његових карактеристика је да садржи малу количину инхибитора, што омогућава да се сулфонамиди, триметоприм и тетрациклини ефикасно процене..

Међутим, мора се имати на уму да медијум мора испунити одређене услове да би се осигурао његов правилан рад, укључујући:

Подешавање ПХ, дубина агара и адекватна концентрација тимина, тимидина, Ца⁺⁺, Мг⁺⁺ и Зн⁺⁺.

Такође морамо знати да је методологија стандардизована и стога сви параметри морају бити испуњени, као што су:

Концентрација инокулума, концентрација и очување дискова антибиотика, постављање одговарајућег броја дискова на агар, растојање између једног диска и другог, стратешко постављање одређених антибиотика, атмосфера, температура и време инкубација.

Препаратион

Измерити 37 гр дехидриране средине Муеллер Хинтон и растворити у 1 литри дестиловане воде. Загрејте медијум уз мешање како бисте га растопили. Пустите да прокува 1 минут.

Узмите аутоклав да стерилизујете на 121 ° Ц током 15 минута. Када се уклања из аутоклава, фиола треба ставити у водено купатило на 50 ° Ц да се охлади. Улијте 25 до 30 мл у стерилне Петријеве посуде пречника 10 цм.

Плоче треба да имају просечну дебљину од 4 мм (идеално), са дозвољеним опсегом од 3-5 мм.

Ако се жели припремити крвни агар користећи базу агара Муеллер Хинтон, 5% стерилне и дефибриниране јањеће крви се прелије на послужавник на плоче..

Коначни пХ медијума треба да буде између 7,2 и 7,4.

Инвестирајте и чувајте у фрижидеру, до употребе. Пре употребе, пустите плочу да поднесе собну температуру.

Боја припремљеног медија је светло беж.

Усес

Користи се за тестирање антибиограма или антибиотика код већине патогена који не расту брзо.

Ако је агар допуњен крвљу, служи за обављање антибиограма захтјевних микроорганизама као што су: Стрептоцоццус пнеумониае, Хаемопхилус сп, Неиссериа менингитидис, између осталог. Такође је коришћена за изолацију Легионелла пнеумопхила.

Антибиограмска техника

Пре извођења антибиограма, мора се припремити бактеријски раствор еквивалентан 1,5 к 10⁸ ћелије.

Да би се то урадило, 3 до 4 колоније су узете из чисте културе и суспендоване у триптиказа сојином бујону или у Муеллер Хинтон бујону, инкубиране 2 до 6 сати и концентрација је подешена стерилним сланим раствором, упоређујући га са Мац Фарланд стандардом. 0.5%.

Ако су они захтевни микроорганизми, колоније се могу суспендовати директно све док не достигну концентрацију од 0,5% Мац Фарланда. Након тога се плоча Муеллер Хинтон сија брисом импрегнираним припремљеним бактеријским раствором.

Да бисте то урадили, умочите обрисак у раствор и уклоните вишак течности тако што ћете притиснути зидове цеви. Одмах након што је штапић прошао преко цијеле површине, не остављајући нетакнута мјеста, онда лагано ротирајте плочу и поново посијајте. Операција се понавља још 2 пута.

Оставите да стоји 10 минута и ставите дискове антибиотика стерилним пинцетом, остављајући простор између њих 24 мм. Након постављања сваког диска на агар, лагано притискајте сваки са стезаљком да бисте били сигурни да су добро пријањани.

Након процеса, плоча се инвертира и инкубира на 35-37 ° Ц у аеробиози 16 до 18 сати. Ако се ради о захтевном микроорганизму, може бити потребна микроаерофилија и ако антибиограм садржи оксацилинске дискове, треба их прочитати 24 сата.

За мјерење промјера сваког халоа користи се равнало. Резултате треба забиљежити у мм. Након тога, добијене вредности су у корелацији са табелама тачака резања које је објавио тренутни ЦЛСИ приручник.

Навести као осетљив (С), интермедијер (И), или резистентан (Р), у зависности од случаја.

Антибиотици се бирају према изолованом микроорганизму и типу инфекције која се јавља.

Понекад би требало размотрити стратешко постављање антибиотика да би се показали фенотипски обрасци отпора.

Стратешко постављање дискова на Муеллер Хинтон агар

За ентеробактерије, диск клавуланске киселине мора бити постављен испред цефалоспорина треће и четврте генерације. Проширење у облику јаја указује да је сој произвођач бета-лактамаза проширеног спектра (ЕСБЛ). То значи да пацијент не треба да се лечи било којим цефалоспорином.

Код стафилокока је важно да се диск еритромицина или азитромицина постави испред клиндамицин диска (Д-тест).

Резистентни хало у еритромицину и равнање у хало клиндамицину указује да сој има индуцибилну отпорност на клиндамицин, сој (РИЦ). То значи да третман са клиндамицином неће бити ефикасан.

За тражење индуктивних сојева АМП Ц у ентеробактеријама и неким не-ферментирајућим грам негативним бацилима, дискови цефтазидима, цефокситина или пиперацилин тазобактана се суочавају са имипенемским диском, на удаљености од 27 мм..

Хало спљоштен на једном од дискова окренутих имипенему указује на присуство индуцибилног АМП Ц.

За тражење конститутивног АМП Ц, клоксацилин 500 μг диска је суочен са цефтазидимом (30 μг) и са цефотаксимом (30 μг), на удаљености од 25 мм. Проширени хало у једном од цефалоспорина указује на позитивност.

Клоксацилински диск се такође може заменити са 9 мм диском Вхатман бр. 6 филтер папира импрегниран са фенил борном киселином (400 μг) са растојањем од 18 мм. Он се тумачи исто као и претходни.

Коначно, истражити производњу метало-бета-лактамаза, посебно у Псеудомонас аеругиноса, диск који је импрегниран са 10 μл етилендиаминететраацетатне киселине (ЕДТА 750 μг) и тиогликолном киселином (СМА 300 μг), који се суочава са дисковима имипенема и меропенема, користи се на удаљености од 15 мм.

Тест је позитиван ако постоји ширење имипенема или меропенема на диск ЕДТА / СМА. Овај резултат мора бити потврђен модификованим Ходге тестом.

Овај метод се састоји у инокулацији соја Есцхерицхиа цоли АТЦЦ 25922 на плочи Муеллер Хинтон. У средини плоче се налази имипенемски диск, а затим се направи флаута од диска према периферији са напрезањем П. аеругиноса осумњичени Можете тестирати до 4 соја по плочи.

Тест ће бити позитиван ако постоји зона изобличења имипенемовог ореола око стрије.

Узроци погрешних резултата

-Дискови лоше очуваних антибиотика могу произвести лажне отпоре. На пример, оксацилински диск је веома осетљив на температурне промене.

-ПХ медијума испод наведеног (киселина) производи мање халое у аминогликозидима и макролидима (ризик од лажне отпорности), а веће халое у пеницилину, тетрациклину и новобиоцину (ризик од лажне осетљивости).

-Ако је пХ изнад назначеног (алкалног), горе описани ефекти су обрнути.

-Медији са високом концентрацијом тимина и тимидина значајно утичу на смањење инхибиторних ореола сулфонамида и триметоприма.

-Високе концентрације калцијума и магнезијума изазивају лажну отпорност аминогликозида, полимиксина Б и тетрациклина против сојева Псеудомонас аеругиноса.

-Ниске концентрације калцијума и магнезијума производе лажне осетљивости аминогликозида, полимиксина Б и тетрациклина против сојева Псеудомонас аеругиноса.

-Присуство цинка утиче на резултате дискова карбапенема (имипенем, меропенем и ертапенем)..

-Дебљина медија испод 3 мм даје лажне резултате осетљивости, док ће дебљина изнад 5 произвести лажну отпорност.

-Мобилизација дискова у антибиограму даје деформисане ореоле, пошто је пражњење антибиотика тренутно.

- Веома слаби инокулуми утичу на резултате, пошто неће бити равномерног или конфлуентног раста у агару, што је неопходан услов да би се могле мерити зоне инхибиције, поред чињенице да се ореоли могу дати веће од нормалних..

-Преоптерећен инокул може дати ореоле мање од нормалних.

-Непоштовање раздаљине између дискова узрокује преклапање једног ауреола и не може се исправно прочитати.

-Инкубирајте са ЦО₂ повећава величину халоса дискова тетрациклина и метицилина.

-Инкубација на температурама испод 35 ° Ц даје веће ореоле.

-Додатак крви смањује величину хало сулфонамида.

Ограничење

Осетљивост антибиотика приказаног у антибиограму против микроорганизма (ин витро) није гаранција да ће радити ин виво.

Контрола квалитета

Да би се знало да ли медиј садржи праву количину тимина, потребно је сијати сој Ентероцоццус фаецалис АТЦЦ 29212 и тестирају осетљивост на триметоприм сулфаметоксазол (СКСТ), требало би дати хало једнак или> 20 мм да би био задовољавајући.

Референце

1. "Агар Муллер-Хинтон." Википедиа, Тхе фрее енцицлопедиа. Нов 16 2018, 12:23 УТЦ. Јан 27, 2019, 04:22
2. Форбес Б, Сахм Д, Веиссфелд А. (2009). Микробиолошка дијагностика Баилеи & Сцотт. 12 ед. Едиториал Панамерицана С.А. Аргентина.
3. Цона Е. Услови за добру студију осетљивости тестом дифузије агара. Рев Цхил Инфецт, 2002; 19 (2): 77-81
4. Дифцо Францисцо Сориа Мелгуизо Лаборатори. Муеллер Хинтон агар са 5% овчије крви. 2009. Доступно на: хттп://ф-сориа.ес
5. Лабораторија за агар БД Муеллер Хинтон ИИ. 2017. Доступно на: .бд.цом
6. Лабораториес Британиа. Муеллер Хинтон агар. 2015. Доступно на: британиалаб.цом
7. Конеман Е, Аллен С, Јанда В, Сцхрецкенбергер П, Винн В. (2004). Микробиолошка дијагноза. 5тх ед. Едиториал Панамерицана С.А. Аргентина.
8. Мартинез-Ројас Д. Беталактамас типа АмпЦ: Опште и методе за фенотипску детекцију. Рев. Соц. Мицробиол. 2009; 29 (2): 78-83. Доступно на: сциело.орг.
9. Перозо А, Цастеллано М, Линг Е, Арраиз Н. Фенотипска детекција металобеталактамаза у клиничким изолатима Псеудомонас аеругиноса. Касмера, 2012; 40 (2): 113-121. Доступно на: сциело.орг.