Агар М.Р.С темељ, припрема и употреба



Тхе агар М.Р.С. је селективна чврста подлога за културу, која се користи за изолацију и бројање бактерија млечне киселине, посебно рода Лацтобациллус. Тај агар су 1960. године створили Ман, Рогоса и Схарпе, средина истог имена, али због своје сложености често се користи скраћеница М.Р.С..

Састављен је од протеозног пептона, екстракта меса, екстракта квасца, глукозе, сорбитан монолеата, дикалијум фосфата, натријум ацетата, амонијум цитрата, магнезијум сулфата, манган сулфата и агара..

Ова композиција омогућава правилан развој бактерија млечне киселине из клиничких узорака, као што су измет, вагинални секрет, орални узорци и мајчино млеко, као и млечне и месне хране..

Не користи се рутински у клиничким лабораторијама, јер су бактерије млечне киселине ретко укључене у патолошке процесе. Међутим, употреба М.Р.С агара је чешћа у области микробиологије хране..

С друге стране, овај медиј користе неки истраживачки центри чији је циљ проучавање бактерија млијечне киселине.

Индек

  • 1 Фоундатион
  • 2 Припрема
  • 3 Усес
    • 3.1 Карактеристике колонија
    • 3.2 Изолација бактерија млечне киселине
    • 3.3 Бројање бактерија млечне киселине
    • 3.4 На нивоу истраживања
  • 4 Контрола квалитета
  • 5 Референце

Фоундатион

Агар Ман, Рогоса и Схарпе има доста сложену композицију. Разбијањем функције коју свака од његових компоненти испуњава, може се објаснити њен темељ.

Протеозни пептон, екстракт меса, екстракт квасца и глукоза су нутријенти који обезбеђују извор угљеника, азота, витамина и минерала неопходних за раст бактерија. Поред тога, глукоза је универзални извор енергије који се користи у већини медија за културу.

С друге стране, да би се подстакао раст бактерија млечне киселине, неопходно је присуство неопходних кофактора (катиона) у метаболизму Лацтобациллуса и сродних бактерија; Ова једињења су соли натријума, магнезијума и мангана.

Слично томе, сорбитан монолеат или полисорбат 80 су извор важних масних киселина када се апсорбују као хранљиви састојци.

Осим тога, сорбитан монолеат и амонијум цитрат дјелују инхибицијом развоја пратеће флоре, посебно Грам-негативних бактерија, осигуравајући селективни карактер овог агара..

Коначно, агар-агар је оно што даје чврсту конзистенцију медију.

Постоје и друге варијанте агара Ман Рогоса Схарпе; један од њих је онај који је допуњен цистеином (М.Р.С.ц), веома користан за изолацију бифидобактерија, међу осталим микроорганизмима. С друге стране, МРС медиј је допуњен неомицином, паромомицином, налидиксинском киселином и литијум хлоридом, посебно за селективно бројање бифидобактерија у млечним производима..

Препаратион

Измерити 68,25 грама дехидрираног медијума и растворити у једном литру дестиловане воде. Оставите да одстоји 5 минута. Да бисте се растворили у целини, често доводите до извора топлоте и пустите да прокључа 1 до 2 минута. Стерилисати у аутоклаву на 121 ° Ц током 15 минута.

Када оставите аутоклав оставите неколико минута и распоредите још вруће у стерилним Петријевим посудама.

Пустите да се плоче учврсте и преокрену, наручите плакете и чувајте у фрижидеру до употребе. Пре употребе оставите да се плоче подвргну собној температури.

ПХ медијума треба да буде 6,4 ± 0,2. Неке комерцијалне куће препоручују пХ од 5,5 до 5,9.

Дехидрирани медијум је беж и припремљен је тамно јантар.

И дехидрирани медијум и припремљене плоче треба чувати на 2 до 8 ° Ц.

Усес

Агар плоче М.Р.С. могу се сијати на површину (исцрпљеност или лопатицом Дригалског). Такође се може сијати по дубини. Плоче треба инкубирати на 37 ° Ц у микроаерофилном облику (4% О2 и 5-10% ЦО2) 24 до 72 сата.

Метода засијавања се бира у складу са сврхом која се наставља (изолација или бројање).

Карактеристике колонија

Претпостављене колоније Лацтобациллуса расту беличасте и имају мукоидни или кремасти изглед на овом агару. Онда морају да се идентификују.

Изолација бактерија млечне киселине

У ту сврху користи се садња по површини. Узорци које треба посадити захтевају претходну процедуру. 

У случају узорака мајчиног млека, препоручује се центрифугирање 1 мл узорка на 14,000 рмп током 10 минута, како би се уклонио масни слој. 900 μл је одбачено, а у преосталих 100 μл седимент је суспендован и изливен на М.Р.С. Тада мора бити равномјерно расподијељена лопатицом Дригалског.

У случају узорака столице, један (1) грам фецеса је измерен и хомогенизован у 9 мЛ 0.1% стерилне пептониране воде, што одговара 1/10 разблажењу. Затим се праве серијска разблажења, док се не добије коначна разблажења од 10-4.

Коначно, узето је 100 μл разблажења 10-2, 10-3 и 10-4 и свако разблаживање се засија на МРС агару, равномерно распоређујући са Дригалски шпатулом.

Бројање бактерија млечне киселине

У овом случају засијавање се врши по дубини.

За узорке мајчиног млека, узмите 1 мЛ и ставите у стерилну конусну пластичну тубу. МРС агар се додаје на температури од приближно 40 ° Ц до коначне запремине од 25 мЛ, добијајући хомогену смешу. Затим се улије у стерилне петријеве посуде на уједначен начин и остави да стоји док се не полимеризује..

Разрјеђења су направљена за узорке столице, као што је горе описано. Узмите 1 мЛ сваког разблажења и ставите у стерилне конусне пластичне епрувете. Дода се растопљени МРС агар до запремине од 25 мЛ.

Мешавина сваког разблажења се једнолично сипа у стерилне Петријеве посуде. На крају оставите да стоји до полимеризације.

На нивоу истраживања

Сваког дана истраживање бактерија млечне киселине постаје интересантније; посебно истраживачи траже да се упознају нове врсте и њихов потенцијал као покретање фермента за стандардизацију у производњи млијечних производа, између осталог.

У том смислу, Алварадо ет ал. (2007) користи агар М.Р.С. да спроведе студију у којој су изоловали, идентификовали и карактерисали бактерије млечне киселине присутне у обученом димљеном венецуеланском сиру.

У сиру су пронашли присуство бактерија родова Лацтоцоццус и Лацтобациллус, и закључили да су смеше изолованих сојева погодне као стартер сојеви у производњи сирева из пастеризованог млека..

С друге стране, Санцхез ет ал. (2017) користи М.Р.С агар. истражити присуство бактерија млечне киселине у дигестивном тракту прасади, како би их користили као природне пробиотике који повећавају продуктивност здравих прасади.

Овим медијем успели су да издвоје четири врсте: Лацтобациллус јохнсонии, Лацтобациллус бревис, Ентероцоццус хирае и Педиоцоццус пентосацеус.

Исто тако, Баез ет ал. (2019) употребљен је М.Р.С. агар. за процену бактерија млечне киселине (БАЛ) и бифидобактерија са пробиотичким потенцијалом у мајчином млеку и фекалијама новорођенчади.

Успели су да изолују 11 БАЛ и 3 Бифидобацтериа сп у мајчином млеку и 8 БАЛ и 2 Бифидобацтериа сп. у столици Сви су задовољили одређене параметре који их акредитују као бактерије са пробиотичком активношћу.

Аутори су закључили да мајчино млеко и фекалије искључиво дојене бебе служе као природни извори пробиотичких бактерија.

Контрола квалитета

Проценити квалитет М.Р.С. контролни сојеви се могу користити као:

Лацтобациллус ферментум АТЦЦ 9338, Лацтобациллус цасеи АТЦЦ 393, Бифидобацтериум бифидум АТЦЦ 11863, Лацтобациллус плантарум МКТА 8014, Лацтобациллус лацтис МКТА 19435, Педиоцоццус дамносус МКТА 29358, Есцхерицхиа цоли и Бациллус цереус.

Очекивани резултати су задовољавајући раст за првих 6 бактерија, док Е. цоли и Бациллус цереус мора бити потпуно инхибиран.

Референце

  1. Алварадо Ц, Цхацон З, Отониел Ј, Гуерреро Б, Лопез Г. Изолација, идентификација и карактеризација бактерија млијечне киселине из Андског ручно димљеног венезуелског сира. Користи се као почетна култивација. Сциентист (Марацаибо) 2007; 17 (3): 301-308. Доступно на: сциело.орг.
  2. Санцхез Х, Фабиан Ф, Оцхоа Г, Алфаро изолација бактерија млијечне киселине из пробавног тракта прасета. Рев. вет. Перу 2017; 28 (3): 730-736. Доступно на: сциело.орг.
  3. Баез Е, Гонзалез Г, Хернандез Г, Лопез Е, Мега М. Процјена бактерија млијечне киселине и бифидобактерија с пробиотичким потенцијалом у мајчином млијеку и измету дјеце у опћини Ацеведо, Миранда 2017. Додипломски рад за стјецање дипломе у Биоанализа Универзитет Царабобо, Венецуела.
  4. Бритисх Лаборатори М.Р.С агар. 2015. Доступно на: британиалаб.цом
  5. Википедиа цонтрибуторс. МРС агар Википедиа, Тхе Фрее Енцицлопедиа. Јануар 10, 2018, 19:44 УТЦ. Доступно на: википедиа.орг Приступљено 17. фебруара 2019. године.
  6. Рои Д. Медији за изолацију и бројање бифидобактерија у млечним производима. Инт Ј Фоод Мицробиол, 200128; 69 (3): 167-82.