Агар ЛИА (Лизин гвожђе) темељ, припрема и употреба



Тхе ЛИА агар (Лизин гвожђе) је биохемијски тест који се користи за идентификацију бактерија из породице Ентеробацтериацеае. Овај медиј су креирали Едвардс и Фифе, на основу Фалковеове формуле.

Изворно је овај тест био бујон који садржи пептоне, екстракт квасца, глукозу, Л-лизин, бромокрезол пурпурну и дестиловану воду. Едвардс и Фифе су додали агар-агар, фери амонијум цитрат и натријум тиосулфат.

Тест се у основи састоји од демонстрирања присуства ензима лизин декарбоксилазе, способног да реагује са карбоксилном групом аминокиселине Л-лизина. Деаминација аминокиселине може такође настати због присуства ензима лизин деаминазе.

Поред тога, састав подлоге омогућава демонстрирање капацитета неких бактеријских родова за производњу водоник-сулфида. Коначно, такође је могуће посматрати производњу или не гас у средини.

Индек

  • 1 Фоундатион
    • 1.1 Пептони и екстракт квасца
    • 1.2 Глукоза
    • 1.3 Л-лизин
    • 1.4 Индикатор пХ (бромокрезол љубичаста)
    • 1.5 Амонијум железов цитрат и натријум тиосулфат
  • 2 Тумачење теста
    • 2.1 Декарбоксилација лизина
    • 2.2 Деаминација лизина
    • 2.3 Производња водоник сулфида (Х2С)
  • 3 Бележење резултата
  • 4 Припрема
  • 5 Усес
  • 6 Референце

Фоундатион

Пептони и екстракт квасца

Као и већина медија за културу, гвожђе лизин агар садржи компоненте које обезбеђују извор хранљивих материја неопходних за раст бактерија. Ове компоненте су представљене пептонима и екстрактом квасца.

Глукоза

Такође, овај агар садржи глукозу која се може ферментисати. Познато је да све бактерије из породице Ентеробацтериацеае ферментирају глукозу.

Овај корак је пресудан, јер ће бити одговоран за закисељавање медијума, што је основни услов да ензим лизин декарбоксилаза, ако је присутан, делује на свој супстрат.

Код неких бактеријских родова може се уочити производња гаса услед ферментације глукозе.

Гас се показује када се у епрувети премести агар, остављајући празан простор на дну епрувете, или разбијајући медијум у два или више делова..

Л-лизин

Када се лизин декарбоксилизује, формирају се диамин (цадаверин) и угљен диоксид.

Декарбоксилација се одвија у присуству коензима пиридоксал фосфата. Ова реакција је неповратна.

ПХ индикатор (бромокрезол љубичаста)

Све промене пХ вредности у медијуму, које су се појавиле у различитим реакцијама, откривене су бромокрезолним пурпурним индикатором пХ.

У том смислу, када долази до закисељавања, медијум постаје жут, а када је алкализација средина враћа се у првобитну љубичасту или љубичасту боју.

Када се деаминација лизина дешава у присуству ензима лизин деаминазе, на површини се формира црвенкаста боја, типична за родове Протеус, Провиденциа и неке врсте Морганеле..

То је због чињенице да се током процеса деаминације формира алфа-кето-карбонска киселина, која реагује са амонијум цитратом у присуству кисеоника, што узрокује наведену боју..

Амонијум-жељезов цитрат и натријум тиосулфат

С друге стране, бактерије које производе сулфид водоника биће доказане присуством натријум тиосулфата (извор сумпора) и фери амонијум цитрата, који је девелопер Х2С.

Бактерије које поседују ензим тиосулфат-редуктазе имају способност да делују тако што смањују присутност натријум тиосулфата, формирајући сулфит и водоник-сулфид (Х).2С).

Ово последње је безбојни гас, али када реагује са солима гвожђа формира метални железов сулфид, који је нерастворљиво једињење (видљиви црни талог)..

Међутим, капацитет Х формације2С са овим медијумом није веома поуздан, јер неке негативне бактерије лизин декарбоксилазе могу да производе Х2С не е формирати црни преципитат, јер киселост медија омета. Стога се препоручује да се провери са другим средствима која садрже гвожђе.

Тумачење теста

Декарбоксилација лизина

Епрувете треба читати након 24 сата инкубације, иначе постоји ризик од погрешног тумачења реакције, пријављивања погрешних резултата.

Мора се запамтити да ће прва реакција која ће се десити бити ферментација глукозе, тако да ће све епрувете након 10 до 12 сати постати жуте..

Ако се на крају периода инкубације (24 сата) посматра жута позадина са љубичастом или љубичастом површином, реакција је негативна. Љубичаста боја површине одговара алкализацији медија употребом пептона.

Позитивна реакција је она у којој су дно и површина цијеви потпуно љубичасте, односно враћа се на изворну боју.

Према томе, ко одређује позитивност теста је база или дно медија. Ако сумњате у боју, можете је упоредити са неиноцулираном ЛИА цијеви.

Деаминација лизина

Цев која показује деаминацију лизина ће имати црвенкасто-браон површину и жуту позадину (киселину), или целу црвенкасто-браон цев..

Ова реакција се тумачи као негативна за декарбоксилацију лизина, али позитивна за деаминацију лизина.

Ова реакција је дефинисана и интерпретирана у косини.

Производња сумпороводика (Х2С)

Позитивна реакција је уочена појавом црног преципитата у целом или делом медијума. Генерално између косине и базе.

Ако се талог појављује у цијелој цијеви, он неће показати друге реакције које се јављају у медију.

Снимање резултата

Приликом тумачења теста резултати се евидентирају на следећи начин:

Прво прочитајте косину, затим дно или тацо, затим производњу Х2С, и на крају производња гаса.

Пример: К / А + (-). То значи:

  • К: Алкални оквир (љубичаста)
  • О: Киселинска (жута) позадина, тј. Негативна реакција декарбоксилације и негативна деаминација.
  • +: Производња сумпороводика
  • (-): Без гаса.

Препаратион

Измерити 35 г дехидрираног гвожђа лизинског агара и растворити у једном литру дестиловане воде.

Загрејте док се агар потпуно не раствори, па га прокувајте на минуту и ​​често мешајте. Раздвојите 4 мл медијума у ​​13/100 епрувете са памучним поклопцем.

Стерилисати у аутоклаву на 121 ° Ц током 15 минута. Уклоните из аутоклава и оставите да се одмара на нагнут начин, тако да постоји дубока база и кратка косина.

Чувати у хладњаку 2-8 ° Ц. Оставите да се охлади пре садње бактеријског соја.

Боја дехидрираног медија је беж, а медијум црвенкасто љубичасте боје.

Крајњи пХ припремљеног медија је 6,7 ± 0,2.

Медијум постаје жут, са пХ једнаким или мањим од 5.2, и љубичастим на пХ 6.5.

Усес

Овај тест, заједно са другим биохемијским тестовима, користи се за идентификацију бацила из породице Ентеробацтериацеае..

Медиј се сије равном петљом или иглом, један или два ударца су направљена на дну цијеви, а затим је површина медија цик-цак.

Инкубира се 24 сата на 35-37 ° Ц у аеробиози. Ако је потребно, оставите да се инкубира још 24 сата.

Веома је корисно разликовати негативне врсте лактозе од Цитробацтера Салмонеллас сп.

Референце

  1. Мац Фаддин Ј. (2003). Биохемијски тестови за идентификацију бактерија од клиничког значаја. 3рд ед. Едиториал Панамерицана. Буенос Аирес Аргентина.
  2. Форбес Б, Сахм Д, Веиссфелд А. (2009). Микробиолошка дијагностика Баилеи & Сцотт. 12 ед. Едиториал Панамерицана С.А. Аргентина.
  3. Конеман Е, Аллен С, Јанда В, Сцхрецкенбергер П, Винн В. (2004). Микробиолошка дијагноза. 5тх ед. Едиториал Панамерицана С.А. Аргентина.
  4. Лабораториес Британиа. Агар лизин гвожђа. 2015. Доступно на: британиалаб.цом
  5. БД Лабораториес ББЛ Лизин гвожђе агар косе. 2007. Доступно на: бд.цом
  6. Валтек Лабораториес Медиум Л.И.А. 2009. Доступно на: андинамедица.цом