Агар Хектоен темељ, припрема и употреба

Тхе Хектоен агар или ентерички Хектоен агар је чврсти, селективни и диференцијални медијум културе. Креирао га је Кинг и Метзгер у Институту Хектоен за изолацију ентеропатогених бактерија родова Схигелла и Салмонелла..

Средство је састављено од протеозног пептона, екстракта квасца, жучних соли, лактозе, сахарозе, салицина, натријум тиосулфата, натријум хлорида, гвожђе цитрата, амонијум цитрата, бромотимол плавог, киселог фуксина и агара. Ова формулација омогућава разликовање родова Схигелла и Салмонелла од осталих бактерија које могу расти у овом медију..

Иако постоје друга средства са истом функцијом као Хектоен агар, ово представља већу предност у поређењу са другим средствима, посебно када желите да обновите врсте Схигелла..

Врсте оба рода производе тешке гастроинтестиналне проблеме код људи због конзумирања контаминиране хране; стога је трансмисија фекално - орална. Због тога је употреба Хектоен агара углавном приказана у микробиолошкој анализи узорака столице и хране..

Индек

• 1 Фоундатион
• 2 Припрема
• 3 Користите
• 4 Контрола квалитета
• 5 Ограничења
• 6 Референце

Фоундатион

Хектоен агар садржи пептоне и екстракт квасца као извор хранљивих материја, обезбеђујући основне елементе за развој микроорганизама.

Међутим, она такође има и жучне соли које делују тако што инхибирају раст неких бактерија, посебно Грам позитивне и неке Грам негативне. Због тога се сматра селективним медијумом.

С друге стране, Хектоен агар је диференцијална подлога. Ово својство добија присуство ферментабилних угљених хидрата као што су лактоза, сахарора и салицин, заједно са системом индикатора пХ, представљеним бромтимол плавим и киселим фуксином..

Све бактерије способне за узгој у овом медију које не припадају роду Салмонелла и Схигелла ће развити лосос или наранчасте колоније са изузетком рода Протеус. То је због ферментације једног или више присутних угљених хидрата, који закисељују медиј, што узрокује окретање пХ индикатора.

Са своје стране, рода Схигелла и Салмонелла нису у стању да ферментирају било који од присутних угљених хидрата, користећи само пептонас као извор енергије, који алкализира околину и због тога су њене колоније плаво-зелене.

Такође у овом медију могу се издвојити бактерије способне за формирање сумпороводика (безбојни гас). Натријум тиосулфат делује као извор сумпора, док је жељезни цитрат најзначајнији агенс. Оба једињења омогућавају формирање црног преципитата сулфида гвожђа који доказује реакцију.

Црни преципитат у средини колоније са прозирним ореолом даје изглед рибљег ока. Ова карактеристика сугерише присуство рода Салмонелла.

Коначно, натријум хлорид одржава осмотску равнотежу и агар даје чврсту конзистенцију медијуму.

Препаратион

Измерити 76 г дехидрираног медијума и растворити у једном литру дестиловане воде. Мјешавину снажно протрести, а затим оставити да одстоји 10 до 15 минута. Може се загревати и кувати, дајући ротирајуће покрете све до потпуног растварања. Овај медијум није аутоклавиран.

Када медиј достигне температуру од приближно 45 ° Ц, волумен од 20 мл се директно сипа у стерилне Петријеве посуде..

Агару се допушта да се стврдне. Тада су спремни за употребу. Препоручљиво је да их одмах користите. Ако то није могуће, треба их чувати у фрижидеру док се не искористе.

Плоче треба уклонити рано из фрижидера пре него што се посаде да би се одржала собна температура.

ПХ медијума треба да буде 7,5 ± 0,2. Боја дехидрираног медија је љубичаста и припремљена је смеђе зелена.

Усе

Употреба Хектоен агара се препоручује за тражење бактерија рода Схигелла и Салмонелла у узорцима столице и хране..

Могућност изолације ових бактерија увелико се повећава ако је узорак претходно обогаћен специјалним бујонима, као што су селенитни бујон, селенитни цистински бујон, тетратионатни бујон итд..

Инокулум мора бити јак и сијање се врши стриацијом. Плоче се инкубирају на 37 ° Ц у трајању од 24 до 48 сати у аеробиози.

Инкубација се препоручује 48 сати јер су карактеристике колонија јасније за њихово тумачење и диференцијацију у овом тренутку.

Контрола квалитета

За контролу квалитета на овом медију користе се сертификовани бактеријски сојеви, као што су: Салмонелла типхимуриум АТЦЦ 14028, Салмонелла ентеритидис АТЦЦ 13076, Схигелла флекнери АТЦЦ 12022 и Схигелла соннеи АТЦЦ 25931.

Очекивани резултати су следећи: Салмонелла типхимуриум анд  Салмонелла ентеритидис морају развити зелено-плаве колоније са или без црног центра. Док ће врсте Схигелла расти као плаво-зелене колоније.

Такође можете укључити сојеве Есцхерицхиа цоли АТЦЦ 29212, Протеус мирабилис, Клебсиелла пнеумониае АТЦЦ 700603, Ентероцоццус фаецалис АТЦЦ 29212 анд Стапхилоцоццус ауреус АТЦЦ 25923.

У овим случајевима посматране карактеристике су следеће: Е. цоли и К. пнеумониае У овом медију ће се развити колоније од лососа до наранџе, са преципитатом исте боје око њих. У међувремену, Протеус ће развити плаво-зелене колоније са или без црног центра.

Док С. ауреус и  Е. фаецалис понекад треба бити инхибиран Е. фаецалис успева да расте као жуте колоније, веома мале.

С друге стране, пошто овај медијум није стерилисан у аутоклаву, важно је процијенити стерилност медија. Према томе, свака припремљена шаржа треба инкубирати једну до две плоче без инокулације на 37 ° Ц током 24 часа у аеробиози.

Очигледно се очекује да на плочи нема раста било које врсте.

Ограничења

-Протеус врсте могу се развити у овом окружењу и карактеристике њихових колонија могу се замијенити са Салмонелла или Схигелла врстама. Због тога свака сумњива колонија мора бити потврђена биохемијским тестовима.

-Потребно је пратити употребу овог медија са другим мање селективним агарима, јер ако се тражени микроорганизам налази у ниским концентрацијама, он се можда неће развити у овом медију..

-Немојте прегрејати током припреме, јер прекомерна топлота мења састав медијума.

-Колоније салмонеле које ферментирају лактозу могу се појавити незапажено.

Референце

1. Википедиа цонтрибуторс. Хектоен ентерални агар. Википедиа, Тхе Фрее Енцицлопедиа. 13. март, 2019, 23:38 УТЦ. Доступно на: .википедиа.орг / Приступљено 16. марта 2019. године.
2. БД Лабораториес БД Хектоен ентерични агар (ХЕ Агар). 2013. Доступно на: бд.цом
3. Лабораториес Британиа. Хектоен ентерички агар. 2015. Доступно на: британиалаб.цом
4. Дифцо Францисцо Сориа Мелгуизо Лабораториес. Агар Хектоен агар. Доступно на: ф-сориа.ес
5. Дифцо & ББЛ Мануал, Хектоен ентерични агар. 2нд Едитион. Доступно на: бд.цом/еуропе