Агар Ендо темељ, припрема и употреба

Тхе Ендо агар или медиј Ендо је чврсти, диференцијални медијум културе са одређеним степеном селективности. Оригинална формула је направљена од Ендо 1904. године како би се разликовале бактерије које ферментирају лактозу од не-ферментирајућих бактерија. У почетку је био дизајниран за изолацију Салмонелла типхи, али касније се циљ медија окренуо потрази за колиформима.

Принцип Ендо агара је задржан, али његова формулација је прошла безбројне промене током година. Тренутно, медијум је састављен од животињског ткива из пробавног пептида, лактозе, дикалиј хидроген фосфата, натријум сулфита, базичног фуксина и агара.

Главна употреба медијума везана је за изолацију и диференцијацију грам-негативних бацила из породице Ентеробацтериацеае и других оближњих породица..

Дуго времена коришћена је у детекцији колиформа у узорцима воде, млечних производа и хране, али је данас употреба овог медија замењена другим сличним функцијама. Међутим, неке микробиолошке лабораторије користе овај агар за изолацију ентеробактерија из узорака клиничког порекла..

Индек

• 1 Фоундатион
• 2 Припрема
  • 2.1 Ендо агар
  • 2.2 Варијанта агара м-Ендо
• 3 Користите
• 4 Контрола квалитета
• 5 Ограничења
• 6 Референце

Фоундатион

Ендо агар садржи пептоне који служе као извор аминокиселина, азота, угљеника и енергије, неопходних за раст незахтјевних микроорганизама.

С друге стране, благо селективни карактер агара је обезбеђен додавањем натријум сулфита и базичног фуксина; обе компоненте делимично или потпуно инхибирају развој већине Грам-позитивних бактерија.

Диференцијални карактер се даје присуством ферментабилног угљених хидрата, који је у овом случају лактоза и базични фуксин, који такође служи као индикатор пХ.

Грам-негативне бактерије које расту на овом агару и могу ферментисати лактозу ће формирати јаке ружичасте колоније; као патогномоника Есцхерицхиа цоли формирање тамноцрвених колонија са зеленим металик сјајним сјајем. То је због високе производње киселина из ферментације угљених хидрата.

Треба напоменути да се медиј који се налази око колонија такође претвара у јаку ружичасту боју. Док не-ферментирајуће грам-негативне бациле лактозе формирају бледо ружичасте колоније сличне средњим или безбојним.

Дикалијум хидроген фосфат балансира пХ медијума и агар је компонента која обезбеђује чврсту конзистенцију.

Препаратион

Ендо Агар

Измерити 41,5 г дехидрираног медијума и растворити у 1 литри дестиловане воде. Загрејте смешу често мешањем док не дође до потпуног растварања подлоге. Стерилисати у аутоклаву на 121 ° Ц, под притиском од 15 лб, током 15 минута.

Приликом уклањања из аутоклава, оставити да се охлади на температуру од око 45-50 ° Ц, мешати пре хомогенизације пре сервирања. Улијте 20 мл у стерилне Петријеве посуде.

Пустите да се плоче учврсте, преокрену и складиште у кутији или замотате у тамни папир пре него што га одложите у фрижидер. Веома је важно заштитити припремљени медијум од директне светлости. Препоручена пракса је да се припреми тачан износ који ће бити потребан.

Ако се чувају у фрижидеру, плоче треба да се каље пре употребе.

ПХ медијума треба да буде између 7,2 и 7,6, а боја припремљене подлоге је бледо ружичаста..

Вариант агар м-Ендо

Постоји још једна верзија Ендо агара (м-Ендо) која следи формулу МцЦартхи, Деланеи и Грассо, која садржи више једињења и варира у смислу припреме..

Ова варијанта садржи: лактозу, триптозу, ензимску дигестију казеина, ензимску дигестију животињског ткива, натријум хлорид, двобазни калијум фосфат, натријум сулфит, екстракт квасца, калијум фосфат монобазни, базични фуксин, натријум деоксихолат, лаурил сулфат натријума и агара.

У овом случају, ми извагамо 51 г дехидрираног медија и суспендујемо га у 1 литри дестиловане воде која садржи 20 мл етанола..

Лагано се загревати док се меша док се медијум потпуно не раствори. Не прегрејати и не стерилисати у аутоклаву. Када је смјеса хомогена, послужите у стерилним Петријевим посудама и оставите да се стврдне.

Усе

У неким земљама се још увек користи за бројање укупних и фекалних колиформа у узорцима воде и хране, посебно присуство Есцхерицхиа цоли као главни индикатор фекалне контаминације.

М-Ендо агар се препоручује од стране Америчке асоцијације за јавно здравље (АПХА) за праћење и контролу програма дезинфекције и третмана отпадних вода, као и за процену квалитета питке воде..

Најчешће коришћена метода је мембранска филтрација, након обогаћивања узорка са Лаурил сулфатном бујоном у трајању од 2 до 4 сата..

Такође се може користити као замена за ЕМБ агар у микробиолошкој анализи хране и воде помоћу технике највероватнијег броја (НМП), посебно у комплетној фази потврђивања да би се потврдило присуство Е. цоли из мутних бујона ЕЦ.

Контрола квалитета

За процену квалитета припремљене серије Ендо агара, засијани су познати или сертификовани контролни сојеви.

Међу сојевима који се могу користити у ову сврху су: Есцхерицхиа цоли АТЦЦ 25922, Есцхерицхиа цоли АТЦЦ 11775, Ентеробацтер цлоацае АТЦЦ 13047, Клебсиелла пнеумониае АТЦЦ 13883, Салмонелла типхимуриум АТЦЦ 14028, Схигелла флекнери АТЦЦ 12022, Протеус мирабилис АТЦЦ 14153 анд Ентероцоццус фаецалис АТЦЦ 11700.

Сојеви се сијају исцрпљењем и инкубирају на 37 ° Ц током 24 сата у аеробиози.

Очекивани резултати су:

• То Есцхерицхиа цоли: колоније снажно црвене, са металним сјајем.
• То Е. цлоацае и К. пнеумониае колоније би требале бити ружичаста слузокожа.
• У случају С. типхимуриум, С. флекнери и П. мирабилис колоније су обично бледо ружичасте или безбојне.
• Коначно, Е. фаецалис очекује се да ће бити делимично инхибиран, тако да би његов раст требао бити слаб са веома малим колонијама јаке ружичасте боје.

Ограничења

-Ендо медиј има ниску селективну снагу, тако да је могуће да неки Грам позитивни микроорганизми као што су Стапхилоцоццус, Ентероцоццус и чак квасци могу расти.

-Други бацили који не припадају породици Ентеробацтериацеае могу се развити у овом медију, као на пример Псеудомонас сп и Аеромонас сп. Карактеристике ових сојева су безбојне неправилне колоније.

-Овај припремљени медијум је веома осетљив на светлост, тако да продужена изложеност томе погоршава систем индикатора, иреверзибилно оштећује медијум.

-Компоненте медијума се сматрају карциногеним, стога треба избегавати директан контакт.

-Дехидрирани медијум је веома хигроскопан и треба га чувати у оригиналној амбалажи на собној температури, чврсто затвореној иу сувој средини.

Референце

1. БД Лабораториес Ендо Агар. 2013. Доступно на: бд.цом
2. Неоген Лабораториес М Ендо Агар. Доступно на: фоодсафети.неоген.цом
3. "Агар Ендо." Википедиа, Тхе фрее енцицлопедиа. 7 сеп 2017, 08:27 УТЦ. Феб 28 2019, 22:55. Доступно у: ен.википедиа.
4. МерцК лабораторија. Ендо агар 2019. Доступно на: мерцкмиллипоре.цом
5. Лабораториес Тецхницал Схеет. М -Ендо Агар ЛЕС. 2015. Доступно на: лиофилцхем.нет