Темељ ЕМАР ЕМБ, припрема и употреба



Тхе ЕМБ агар је селективна и диференцијална чврста подлога за културу која се користи за изолацију грам негативних бацила, углавном из породице Ентеробацтериацеае, и других не-захтевних грам негативних бацила. Познат је и по акрониму ЕАМ, што значи еозин-метиленско плаво.

Овај медијум су креирали Холт-Харрис и Теагуе 1916. Садржи пептон, лактозу, сахарозу, дикалијум фосфат, агар, еозин, метиленско плаво и воду. Веома је сличан МацЦонкеи агару, нарочито ако се користи ЕМБ агар модификован Левином, који не садржи сахарозу..

У ствари, свака лабораторија одлучује да ли ради са једном или другом, пошто испуњавају исту функцију, иако су биохемијски различите.

Чак има исти недостатак као и класични МацЦонкеи агар у смислу производње роја од рода Протеус. Због тога, да бисте избегли овај феномен, можете повећати концентрацију агара до 5%.

Индек

  • 1 Фоундатион
    • 1.1 Селективно
    • 1.2 Диференцијал
  • 2 Припрема
  • 3 Усес
  • 4 Контрола квалитета
  • 5 Завршна разматрања
  • 6 Референце

Фоундатион

Селективно

ЕМБ агар је суптилно селективан јер садржи анилинске боје (еозин и метиленско плаво), које делују као инхибитори, спречавајући раст већине Грам-позитивних бактерија и неких захтевних грам-негативних бацила..

Међутим, овај агар има недостатак да неке Грам-позитивне бактерије могу одолети присуству инхибиторних супстанци и расти као мале безбојне тачкасте колоније, као што су Ентероцоццус фаецалис и неке Стапхилоцоццус.

Такође можете узгајати одређене квасце, као нпр Комплекс Цандида албицанс, Даће врло мале ружичасте колоније. Чак и хламидоспоре се могу развити из овог квасца ако се узорак сије дубином.

Дифферентиал

Са друге стране, ЕМБ агар је такође диференцијална подлога, пошто ова боја заједно (еозин и метиленско плаво) имају својство формирања талога на киселом пХ, тако да служе као индикатори њихове производње..

Због тога, слабо ферментирајуће бактерије лактозе или сахарозе производе пурпурне колоније за 24 до 48 сати. На пример, родови Клебсиелла, Ентеробацтер и Серратиа.

Бактерије које јако ферментирају лактозу, као што су Есцхерицхиа цоли, или сахароза, као Иерсиниа ентероцолитица о Протеус пеннери, формирају зеленкасто-црни преципитат који даје карактеристичан метални сјај овим врстама.

Треба напоменути да ако се користи ЕМБ левински медијум (без сахарозе), Иерсиниа ентероцолитица и Протеус пеннери они ће произвести транспарентне колоније.

Бактерије које не ферментирају лактозу или сахарозу храни се присуством пептона који обезбеђују аминокиселине и азот неопходне за развој бактерија и производе транспарентне колоније. На пример, родови Салмонелла и Схигелла, између осталих.

Исто тако, важно је напоменути да рода Ацинетобацтер може представљати колоније плаве боје лаванде, иако није ферментор лактозе, нити сахарозе, али имају својство да фиксирају метиленско плаво у својој ћелијској стени. То се може десити и код других оксидативних бактерија.

Препаратион

Оригинални дехидрирани медијум је светло беж.

Да би се припремила ова подлога за културу, 36 грама дехидрираног медија треба измерити и суспендовати у бочици која садржи један литар дестиловане воде..

Након остављања смеше 5 минута у мировању, доведите фиолу у извор топлоте, мешајте енергично и стално док не заври и потпуно се раствори..

Затим, растворени медијум за културу се мора стерилисати употребом аутоклава на 121 ° Ц током 15 минута.

На крају времена, он је уклоњен из аутоклава и остављен да кратко стоји. Затим се сервира још врућа (45 - 50 ° Ц) између 15 до 20 мл агара у свакој стерилној петријевој посуди. Медиј треба да буде плави лакмус.

После сервирања плоче се остављају благо откривене док се агар мало не охлади. Затим су покривени и пуштени да се потпуно стврдну. Касније се наручују у држачу обрнуте плоче и чувају у фрижидеру (8 ° Ц) док се не употребе.

Овај поступак се пожељно изводи у поклопцу ламинарног протока или испред Бунсен пламеника да би се избегла контаминација.

Важно је имати на уму да ће свака комерцијална кућа указати на количину која ће се вагати да би се припремио медијум културе.

Коначни пХ медија треба да буде 7,2 ± 0,2

Усес

Овај медиј се користи за сијање урина и фекалија или било које врсте клиничких узорака, посебно ако се сумња на присуство не-захтевних грам-негативних бацила, као што су бацили из породице Ентеробацтериацеае, који веома добро расту у овом медију..

Ентеропатогене бактерије родова Схигелла и Салмонелла се разликују по својим безбојним или благо јантарним колонијама..

Остали не-ферментирајући лактозни бацили такође расту, као што су Аеромонас, Псеудомонас, Ацинетобацтер, између осталих..

Исто тако, овај медиј је веома користан у микробиолошкој анализи хране и воде, јер је идеалан за комплетну потврдну фазу одређивања колиформа, односно, за потврђивање присуства Е. цоли из мутних бујона ЕЦ, из највјероватније технике бројања (НМП).

Контрола квалитета

Да би се потврдило да ново култивисана средина културе добро функционише, контролни сојеви се могу засадити да би се посматрале карактеристике колонија и потврдило да они дају како се очекује.

За ово, АТЦЦ сојеви или добро идентификовани сојеви Е. цоли, Ентеробацтер аерогенес, Клебсиелла сп, Салмонелла типхимуриум, Схигелла флекнери, Псеудомонас аеругиноса и неке Грам-позитивне бактерије, као С. ауреус.

То се очекује Е. цоли Створите добро развијене плавичасто-црне колоније са зеленим металик сјајем. Све док, Ентеробацтер аерогенес и Клебсиелла сп морају дати добро развијене мукозне колоније плавичасто-црне боје.

Са своје стране, Салмонелла типхимуриум и Схигелла флекнери, оне морају развити велике колоније, безбојне или са благом јантарном бојом.

Коначно жанр Псеудомонас аеругиноса расте као безбојне колоније неправилне величине, док Грам-позитивне бактерије морају бити потпуно инхибиране или расту штедљиво са врло малим колонијама.

Завршна разматрања

Понекад стерилизација узрокује да се метиленско плаво смањи, посматрајући наранџасти медијум. Да би се метиленско плаво оксидирало и да би се љубичаста боја опоравила, мора се нежно мешати док се боја не опорави.

Исто тако, након стерилизације може се преципитирати боја, тако да се мора добро промијешати прије послуживања Петријеве посуде.

Референце

  1. Цамацхо А, Гилес М, Ортегон А, Палао М, Серрано Б и Велазкуез О. 2009. Технике за микробиолошку анализу намирница. 2нд ед. Хемијски факултет, УНАМ. Мексико.
  2. Царранза Ц, Леон Р, Фалцон Н, Неуманн А, Кромм Ц. Карактеризација и дистрибуција сојева Есцхерицхиа цоли Потенцијално патогени изолати пилећег бројлера са перадарских фарми у Перуу. Рев. вет. Перу 2012 23 (2): 209-219. Доступно на: сциело.орг.
  3. Лабораториес Цонда С.А. Еозин агар и метиленско плаво. 2010. Доступно на: цондалаб.цом
  4. Лабораториес Британиа. Левине Е.М.Б (Витх Еосин анд Метхилене Блуе) 2011. Доступно на: британиалаб.цом
  5. БД Лабораториес БД ЕМБ агар (Еосин Метхилене Блуе Агар), модификован. 2013. Доступно на: бд.цом
  6. Конеман Е, Аллен С, Јанда В, Сцхрецкенбергер П, Винн В. (2004). Микробиолошка дијагноза. (5. изд.). Аргентина, Уводник Панамерицана С.А..
  7. Форбес Б, Сахм Д, Веиссфелд А. 2009. Микробиолошка дијагностика Баилеи & Сцотт. 12 ед. Аргентина Панамерицана С.А Уводник