Агар има стандардну основу, припрему и употребу

Тхе стандардни рачун агара је чврста, неселективна подлога за културу, дизајнирана за квантификацију аеробног микробног оптерећења присутног у узорцима воде за пиће, отпадних вода, млечних напитака, између осталих намирница. Овај медијум је такође познат као ПЦА агар, за акроним у енглеском Плате Цоунт Агар. Креирали су је 1953. године Буцхбиндер, Барис и Голдстеин.

Стандардни рачун за агар састављен је од екстракта квасца, глукозе, агара и дестиловане воде. Ова формулација садржи основне нутритивне елементе који омогућавају развој садашњег аеробног микробног оптерећења, не захтијевајући.

Пошто медијум не садржи инхибиторе, бактерије се могу развити без икаквих ограничења, тако да је идеалан за опште пребројавање колонија. Међутим, техника квантификације плоча неће детектовати све присутне бактерије, већ само оне које су способне да расту у условима околине којима је подвргнут стандардни сјетвени агар..

Овде је квантизација техника плоча покушава да генерално одредила количина бактерија мезофилне типа аеробиц, односно оне спроведена на температурама између 25 и 40 ° Ц, уз оптималне температуре за раст на 37 ° Ц.

Ова бактеријска група је веома важна, јер постоји већина патогених бактерија за човека.

Треба напоменути да је понекад интересантно квантификовати количину психрофилних бактерија присутних у храни. Ове бактерије су оне које се развијају на ниским температурама (< 20°C) y son las responsables de que los alimentos se descompongan más rápido, aun estando en nevera.

Исто тако, термофилне бактерије, које се развијају у распону од 50 ° Ц до 80 ° Ц или више, могу бити важне у одређеним врстама хране као што су конзервиране.

Квантификација микроба се изражава у јединицама које формирају колоније (ЦФУ) по граму или милилитру узорка.

Индек

• 1 Фоундатион
• 2 Припрема
  • 2.1
  • 2.2 За површинску садњу
• 3 Користите
  • 3.1 Техника за излијевање плоче (засијано дубином)
  • 3.2 Техника засијана на површини
• 4 Контрола квалитета
• 5 Ограничења
• 6 Референце

Фоундатион

Стандардни медијум за бројање је дизајниран да омогући задовољавајући развој незахтевних аеробних бактерија, пошто екстракт квасца, трихеин и глукоза обезбеђују неопходне хранљиве материје за добар развој микроба..

С друге стране, медиј има јасну боју и транспарентан изглед, због чега је идеалан за приказивање колонија развијених методом дубоке сетве (сипање у тањир)..

Такођер је могуће бројати колоније методом сијања на површини лопатицом Дригалског.

Када је микробиолошко оптерећење велико, децимална разблажења узорка који се испитује морају бити направљена како би се израчунале ЦФУ.

Треба напоменути да је овај медиј препоручен од стране Америчке асоцијације за јавно здравље (АПХА) за бројање аеробних мезофила.

Препаратион

Измерити 23,5 г дехидрираног медија и растворити у једном литру дестиловане воде. Да би се потпуно растворила, мешавина се мора често загревати док се не заври. Следећи кораци зависе од технике сејања која ће се користити.

За технику сипања плоче

Дистрибуирати дозирањем од 12 до 15 мл у епрувете. Затим стерилисати у аутоклаву на 121 ° Ц током 15 минута. Оставити да се вертикално очврсне у облику блока. Чувати у фрижидеру до употребе.

Отопите знак када ће се користити. Када се отопи, држати га у воденом купатилу на 44-47 ° Ц док се узорци припремају.

За садњу на површини

Стерилизујте медијум у аутоклаву на 121 ° Ц и затим дистрибуирајте 20 мл у стерилне петријеве посуде. Оставити да се очврсне, преокренути и чувати у фрижидеру до употребе.

Опрати плоче пре употребе. ПХ медијума треба да буде 7,0 ± 0,2.

Усе

Бројање агар стандарда се користи у техници бројања аеробних мезофила током микробиолошке анализе воде и хране. Бројење аеробних мезофила је неопходно, јер одређује санитарни квалитет испитиваног узорка.

Примена ове технике (користећи овај медијум) омогућава макроскопску визуализацију изолованих колонија за њихову квантификацију.

Техника лијевања плака (засијано дубином)

-Процедура

Техника се састоји од следећег:

1) Хомогенизујте узорак како бисте прерасподијелили присутне бактерије.

2) Почетна суспензија се изводи у стерилној бочици или врећици, поштујући однос 10 г или 10 мл узорка у 90 мл разблаживача (10)^-1).

3) Од почетне суспензије, одговарајућа децимална разблажења се праве у зависности од врсте узорка. Пример: (10^-2, 10^-3, 10^-4). Разблажења су направљена са пептонском водом или фосфатним пуфером.

Да бисте то урадили, узмите 1 мл почетне суспензије и ставите у 9 мл разблаживача, ако је потребно наставите разблаживање, узимајући сада 1 мл разблажења.^-2 и тако даље.

4) Узмите 1 мл сваког раствора и ставите у празне стерилне Петријеве посуде.

5) Додати на сваку плочу 12 до 15 мл стандардног броја агара претходно растаљеног и постављеног на 44 - 47 ° Ц.

6) Пружите глатке ротационе покрете плочама да равномерно распоредите узорак у агар и оставите да се стврдне.

7) Обратите плоче и инкубирајте на 37 ° Ц у аеробиози 24 до 48 сати.

8) Када је време завршено, наставите да прегледате плоче и пребројите колоније у разређењу које то дозвољава. Изабрана је за бројање плоча које имају између 30 и 300 ЦФУ.

Бројање се може обавити ручно или се може користити опрема бројача колонија.

Дозвољене вредности по мл узорка могу варирати од земље до земље у складу са стандардима којима се управљају.

-Прорачун УФЦ-а

Општа калкулација се врши следећом формулом:

Изразите резултате у 1 или 2 цифре, помножене са одговарајућом базом 10. Пример: ако је резултат 16.545, он се заокружује на основу треће цифре на 17.000 и изражава се на следећи начин: 1.7 к 10⁴. Сада, ако је резултат 16,436 је заокружен на 16,000 и изражен је 1,6 к 10⁴.

Техника постављена на површину

-Процедура

-Инокулирајте са 0,1 мл директног узорка ако је течна, почетна суспензија 10^-1 или узастопних разблажења 10^-2, 10^-3 итд., у средини стандардне плоче са агарским рачуном.

-Узорак равномерно распоредите помоћу Дригалски лопатице или стаклене шипке у облику слова Л. Оставите да стоји 10 минута.

-Обрнути плоче и инкубирати у аеробиози на 37 ° Ц током 24 до 48 сати.

-Наставите са бројањем колонија, изаберите оне плоче које су у распону од 20 - 250 ЦФУ.

-Прорачун УФЦ-а

За израчунавање се примјењује фактор разрјеђивања, који је инверзни. Број је заокружен на 2 значајне цифре (заокруживање у складу са трећом цифром) и изражава се у снази базе 10. На пример, ако се 224 ЦФУ броје у узорку без разблаживања (10)^-1), Пријављено је 22 к 10¹  УФЦ, али ако је бројка 225, пријављује се 23 к 10¹ УФЦ.

Сада, ако бројите 199 ЦФУ у разблажењу 10^-3, 20 к 10 ће бити пријављено⁴ УФЦ, али ако се броје 153 ЦФУ у истом разблажењу, пријављује се 15 к 10⁴ УФЦ.

Контрола квалитета

Стандардни медијум за бројање култура може се проценити коришћењем познатих сертификованих сојева, као што су: Есцхерицхиа цоли АТЦЦ 8739, Стапхилоцоццус ауреус АТЦЦ 6538, Бациллус субтилис АТЦЦ 6633, Лацтобациллус ферментум АТЦЦ 9338, Стапхилоцоццус епидермидис АТЦЦ 12228, Схигелла флекнери АТЦЦ 12022.

Ако је подлога културе у оптималним условима, очекује се задовољавајући раст у свим случајевима, осим за Л. ферментум које могу имати редовне перформансе.

Да би се проценила стерилност медијума за културу, једну или две плоче сваке припремљене шарже (неинокулиране) треба инкубирати на 37 ° Ц у аеробиози 24 сата. На крају овог времена, не треба посматрати раст или промену боје медијума..

Ограничења

-Немојте растопити агар више од једном.

-Припремљена подлога може да траје до 3 месеца док се чува у фрижидеру и заштићена од светлости.

-Овај медијум није погодан за захтјевне микроорганизме, нити за анаероб.

Референце

1. Национална администрација за лекове Храна и медицинска технологија (АНМАТ). Микробиолошка анализа хране, званична аналитичка методологија, индикаторски микроорганизми. 2014 Волуме 3. Доступно на: анмат.гов.ар
2. Дифцо Францисцо Сориа Мелгуизо Лабораториес, С.А. Агата за бројеве плоча. 2009. Доступно на: хттп://ф-сориа.ес
3. Лабораториес Цонда Пронадиса. Агар за стандардне методе (ПЦА) према АПХА и ИСО 4833. Доступно на: цондалаб.цом
4. Лабораториес Британиа. Бројање на плочи агара. 2015. Доступно на: британиалаб.цом
5. Цамацхо А, Гилес М, Ортегон А, Палао М, Серрано Б и Велазкуез О. 2009. Технике за микробиолошку анализу намирница. 2нд ед. Хемијски факултет, УНАМ. Мексико Доступно на: депа.фкуим.унам