Објави:
Агар ЦЛЕД фондација, употреба и припрема
Тхе ЦЛЕД агар (Цистин-Лактоза-електролита-Недовољно) је добар култивирани медиј диференцијал се користи за дијагнозу инфекција уринарног тракта. Композиција медијума културе је дизајниран за добро раст уропатхогенс и идеалан је за квантификацију колонија формираних јединица (ЦФУ).
ЦЛЕД медијум културе је неселективан, јер у њему могу расти Грам-негативни и Грам-позитивни микроорганизми. Али то није проблем, јер је већина инфекција уринарног тракта узрокована једном врстом микроорганизама.
У случају полимикробних инфекција могу се добити 2 или 3 различите бактерије, али је то врло ријетко и најчешће је контаминирано узорцима..
Међу грам-негативним бактеријама које могу расти у овом медију су бацили који припадају породици Ентеробацтериацеае и други цријевни бацили, уропатогени који се најчешће изолирају у узорцима урина, слиједећи: Есцхерицхиа цоли, Клебсиелла пнеумониае, Протеус мирабилис, Морганелла моргании, Псеудомонас аеругиноса, између осталог.
Исто тако, међу Грам-позитивним бактеријама које могу расти у овом медију су Стапхилоцоццус ауреус, Стапхилоцоццус сапропхитицус, Ентероцоццус фаецалис, Стрептоцоццус агалацтиае, Цоринебацтериум сп, Лацтобациллус сп и могу чак да расту квасац, као комплекс Цандида албицанс.
Међутим, због хемијског састава медија не дозвољава раст неких захтјевних генитоуринарних патогена, као што је Неиссериа гоноррхоеае, Гарднерелла вагиналис, између осталог.
Индек
- 1 Темељ ЦЛЕД агара
- 2 Темељ ЦЛЕД агара (Бевис)
- 3 Усес
- 3.1 Сејање узорака урина
- 3.2 Тумачење
- 3.3 Идентификација
- 4 Припрема
- 5 Референце
Основа ЦЛЕД агара
ЦЛЕД медијум за културу има као извор енергије месни екстракт, хидролизат казеина панкреаса и желатин хидролизат. Они обезбеђују хранљиве материје за развој незахтјевних бактерија.
Садржи и цистин, аминокиселину која омогућава раст колиформа, која се разликује по својој малој величини.
Исто тако, лактоза садржи угљикохидрате који се могу ферментирати, због тога је овај медиј диференцијални; да су у стању да разликују бактерије које ферментирају од не-ферментирајуће лактозе.
Бактерије које ферментирају претварају пХ медијумом у производњу киселина, развијају се жуте колоније, док не-ферментирајуће бактерије не генеришу промене у медијуму, стога узимају боју оригиналног агара, зелене боје.
Реакција ферментације се открива захваљујући присуству пХ индикатора, који је у овом медију бромтимол плаво.
С друге стране, ниска концентрација електролита у медију инхибира типични инвазивни раст рода Протеус, зове се ефекат ројења. Ово ствара предност у односу на друга средства, јер омогућава пребројавање УФЦ-а, укључујући и присутност рода Протеус.
Међутим, ниска концентрација електролита инхибира раст неких врста рода Схигелла, што је то недостатак у односу на друга средства.
Основа ЦЛЕД агара (Бевис)
Постоји варијанта или модификација овог медија од стране Бевис-а, који је у оригиналну композицију уградио оригинални састав фуксинске киселине (Андраде индикатор). Делује заједно са бромотимол плавом да би разликовала ферментацију од не-ферментирајућих бактерија.
Разлика између конвенционалног и модификованог медија је боја коју прихватају колоније. У случају бактерија које ферментишу лактозу, колоније добијају црвенкасто наранџасту боју са ружичастом или црвеном ауреолом, док су оне које нису ферментирају плавичасто сиве..
Усес
ЦЛЕД агар се користи искључиво за сетву узорака урина. Употреба овог медија је нарочито честа у европским лабораторијама, док је у Америци мање коришћена.
Прикупљање узорка мора задовољити одређене параметре да би се добили поуздани резултати, укључујући:
- Не узимајући антибиотике пре узимања узорка.
- Пожељно је да урин узима од првог сата ујутро, пошто је концентрисан, када није могуће узети узорке инвазивним методама..
- Темељито опрати гениталије прије узимања узорка.
- Баците прву струју за мокрење и ставите посуду.
- Сакупити између 25 до 30 мл урина у стерилно означене контејнере.
- Однесите одмах у лабораторију окружену ледом.
- Мора се обрадити прије 2 сата емисије или хладити на 4 ° Ц највише 24 сата.
Сетва урина
Узорак урина мора бити разблажен 1:50.
За разблаживање, ставите 0,5 мл урина пацијента и разблажите га са 24,5 мл стерилног физиолошког раствора.
Измерити 0,1 мл разређеног урина и сијати по површини дригалском шпатулом на ЦЛЕД медију. Ово је метода засијавања назначена за бројање колонија. Због тога се користи у узорцима урина, јер се резултати морају изразити у ЦФУ / мл.
За квантификацију добијених колонија, поступите на следећи начин: бројите колоније плоче и помножите са 10, а затим са 50. На тај начин добијате количину ЦФУ / мл урина..
Тумачење
Бројање изнад 100,000 ЦФУ / мл - Индичка инфекција урина
Бројање испод 1000 ЦФУ / мл - Нема инфекције
Бројање између 1000-10,000 ЦФУ / мл - Сумњиво, могућа контаминација, понављање узимања узорака.
Идентификација
Колоније које се узгајају на ЦЛЕД агару треба направити Грам и зависно од морфотипских карактеристика микроорганизма, врши се одређена субкултура.
На пример, ако је Грам-негативним бацилима се садити на МацЦонкеи агару, где потврђују ферментација или лактоза. Поред тога, храниво агар је везана за тестирање оксидазе.
У случају да Грам открива Грам позитивне коке може се субкултивирати у сланом манитол агару иу нутритивном агару. У потоњем се изводи тест каталазе. Коначно, ако се примећују квасци, сијати ће се на Сабоурауд агар.
Многе лабораторије отклањају употребу ЦЛЕД медија и више воле да користе крвни агар, МацЦонкеи и хранљиви агар за сијање узорака урина..
Препаратион
У бочици са једним литром дестиловане воде, растворити 36,2 грама прашкастог клара агара. Након 5 минута одмора, загрејте ресуспендовани агар, стално мешајте до кључања 1 минут.
Затим стерилисати на 121 ° Ц 15 минута у аутоклаву. Када је време завршено, уклони се из аутоклава и остави да се охлади до температуре од 45 ° Ц. После тога се послужује између 15 и 20 мл у свакој стерилној Петријевој посуди.
Поступак за послуживање плоча мора се обавити унутар ламинарног поклопца или испред Бунсен пламеника како би се избјегла контаминација.
Плоче су остављене да се охлади укупно су распоређени у портаплакуеро обрнутог и складишти у хладњак (2-8 ° Ц) до употребе.
Коначни пХ припремљеног медија треба да буде 7,3 ± 0,2.
Референце
- Препоруке за микробиолошку дијагностику инфекције уринарног тракта. цхил инфецтол. 2001; 18 (1): 57-63. Доступно на: сциело.орг.
- Панцхи Ј. Идентификација микробиолошког агенса који узрокује инфекције урина код интерних пацијената који пролазе кроз катетеризацију мокраћне бешике. 2016. Преддипломски рад на конкурсу за лиценцирање у Клиничкој лабораторији. Технички универзитет Амбато. Еквадор.
- Лабораториес Британиа. Пола ЦЛЕД. Доступно на: британиалаб.цом.
- Ренилаб Лабораториес Упутство за употребу, ЦЛЕД Агар. 2013 Доступно на: ввв.ренилаб.инд.бр.
- Цултимед Лабораториес Основни приручник за микробиологију. Доступно на: ицтсл.нет.
- Муноз П, Церценадо Е, Родригуез-Цреикемс М, Диаз МД, Виценте Т, Боуза Е. Опција ЦЛЕД агар у рутинској култури урина. Проспективна и компаративна евалуација. Диагностиц Мицробиол Инфецт Дис. 1992; 15 (4): 287-90.
- Гарциа П, Паредес Ф, Фернандез дел Баррио М. (1994). Практична клиничка микробиологија. Универзитет у Цадизу, друго издање. УЦА Публицатион Сервице.