Симмонсов цитратни агар, припрема и употреба



Тхе Симмонс Цитрате агар То је чврсти медијум који се користи као биохемијски тест за идентификацију микроорганизама, посебно грам-негативних бацила. Оригинални медиј је створио Косер 1923. године.

Косер цитратни медијум се састојао од бујона који садржи натријум фосфат, амонијум фосфат, монокалијум фосфат, магнезијум сулфат и натријум цитрат..

Као што се може видјети, једини извор угљика у медију је цитрат, а душик је амонијев фосфат, протеини и угљикохидрати се изостављају као извор ових елемената, они су обично присутни у другим медијима..

Стога се бактерија инокулисана у том медију може репродуковати само ако је у стању да узме цитратни угљеник. Тест је био позитиван ако је у медијуму дошло до замућења, али је имао недостатак да може доћи до неспецифичне замућености.

Овај проблем решио је Симмонс додајући агар и бромотимол плаву у Косер-ову оригиналну формулу. Иако је принцип исти, он се различито тумачи.

Индек

  • 1 Фоундатион
    • 1.1 Режим засијавања
    • 1.2 Тумачење
  • 2 Припрема
  • 3 Користите
  • 4 Завршна разматрања
    • 4.1 Инокулум
    • 4.2 Сеедед
    • 4.3 Интензитет боје
  • 5 Референце

Фоундатион

Неке бактерије имају способност да преживе у одсуству ферментације или производње млечне киселине, којима је потребна енергија употребом других супстрата. У овом тесту једини извор угљика је цитрат.

Бактерије које су у стању да преживе у овим условима брзо метаболишу цитрат кроз алтернативу традиционалном путу, користећи циклус трикарбоксилне киселине или цитратни ферментациони циклус..

Катаболизам цитрата од бактерија садржи ензимски механизам без интервенције коензима А. Овај ензим је познат као цитрицаза (цитрат оксалоацетат-лијаза) или цитратна десмолаза. Реакција захтева присуство бивалентног катјона, који се у овом случају снабдева магнезијумом.

Реакција ствара оксалоацетат и пируват, који затим доводе до настанка органских киселина у средини алкалног пХ насталог коришћењем извора азота. Ове органске киселине се користе као извор угљеника који генерише карбонате и бикарбонате, што додатно алкализира медијум.

Совинг моде

Симмонс цитратни медијум треба лагано инокулирати у реп рибе помоћу равне петље или игле и инкубирати 24 сата на 35-37 ° Ц. На крају времена резултати се посматрају.

Засејавање се врши само на површини агара. Немојте бушити.

Тумачење

Ако је медијум оригиналне боје (зелене боје) и нема видљивог раста, тест је негативан, али ако се средина промени у плаву, то указује на присуство алкалних производа, што се детектује помоћу пХ индикатора. У овом случају тест је позитиван.

То се дешава зато што ако бактерија користи угљеник цитрата, такође је у стању да узме азот амонијум фосфата којим ослобађа амонијак, алкализирајући медијум.

С друге стране, ако се у медијуму посматра раст бактерија, али нема промјене у боји, тест треба сматрати и позитивним, јер ако постоји раст то значи да је бактерија била у стању да користи цитрат као извор угљеника, иако у овом тренутку нема промене пХ вредности (понекад то може да буде).

Ако постоји сумња у тумачењу коначне боје, може се упоредити са тубом неинокулираног цитрата.

Препаратион

Одвити 24,2 г дехидрираног медијума за један литар воде. Помешајте и оставите да стоји око 5 минута. Завршити растварање медијума загревањем 1 или 2 минута, често мијешајући.

Послужите 4 мл у епрувете и аутоклавујте на 121 ° Ц током 15 минута. Када напуштате аутоклав, нагните се помоћу носача на такав начин да се агар стврдне у облику врха флауте са малом крпом или дном и више.

Крајњи пХ цитратног медијума је 6.9 (зелено). Овај медијум је веома осетљив на промену пХ вредности.

При пХ 6 или испод, медијум постаје жут. Ова боја није уочена у тесту са бактеријама.

А при пХ 7,6 или изнад, медијум се мијења у интензивно пруско плаво.

Усе

Симмонс цитратни агар се користи за идентификацију одређених микроорганизама, посебно бацила који припадају породици Ентеробацтериацеае и других бацила глукозе који не ферментирају..

Завршна разматрања

Симмонс цитратни медијум је веома деликатан тест, јер се могу добити лажно позитивни резултати ако се направе одређене грешке.

Треба водити рачуна о следећем:

Инокулум

Не правите врло густу или напуњену бактеријску инокулацију, јер она може изазвати настанак бакрено-жуте боје на мјесту садње, без утјецаја на остатак медија, али може довести до увјерења да постоји раст. Исто не значи позитивност теста.

Исто тако, дебели инокулум може генерисати лажно позитиван резултат, јер претходно формирана органска једињења унутар ћелијских зидова умирућих бактерија могу ослободити довољно угљеника и азота да окрену пХ индикатор.

Због тога је идеално да се игла уместо платинске ручке наноси, како би се избегло узимање вишка материјала.

Совн

С друге стране, када се батерија биохемијских тестова сади за идентификацију дотичног микроорганизма, важно је да се тест цитрата први инокулира, како би се избегло повлачење протеина или угљених хидрата из другог медијума..

Под овим околностима могуће је добити лажно позитиван резултат, јер ће се било која од ових супстанци које се унесу грешком метаболисати и изазвати промену пХ вредности..

Други начин да се избегне повлачење супстанци је да се спали ручка и узме нови инокулум између једног теста и другог.

Такође треба водити рачуна када се додирује колонија да би се извршио инокулум, јер треба избегавати повлачење дела агара из културе из које долазе бактерије, због претходно објашњеног..

У том смислу, Матсен, Схеррис и Брансон препоручују разблаживање инокулума у ​​физиолошком раствору пре инокулације цитратног теста да би се избегао трансфер других извора угљеника..

Интензитет боје

Мора се узети у обзир да интензитет боје произведене када је тест позитиван може варирати у зависности од комерцијалне куће.

Поред тога, постоје микроорганизми који су позитивни на тест у 24 сата, али постоје и други сојеви који захтевају 48 сати или више да произведу промену пХ вредности..

Референце

  1. Мац Фаддин Ј. (2003). Биохемијски тестови за идентификацију бактерија од клиничког значаја. 3рд ед. Едиториал Панамерицана. Буенос Аирес Аргентина.
  2. Форбес Б, Сахм Д, Веиссфелд А. (2009). Микробиолошка дијагностика Баилеи & Сцотт. 12 ед. Едиториал Панамерицана С.А. Аргентина.
  3. Конеман Е, Аллен С, Јанда В, Сцхрецкенбергер П, Винн В. (2004). Микробиолошка дијагноза. 5тх ед. Едиториал Панамерицана С.А. Аргентина.
  4. БД Лабораториес ББЛ Симмонс Цитрате Агар Слантс. 2015. Доступно на: бд.цом
  5. Лабораториес Британиа. Симмонс Цитрате Агар. 2015. Доступно на: британиалаб.цом
  6. Валтек Диагностиц Лабораториес. Симмонс Цитрате Агар. 2016. Доступно на: андинамедица.цом.