Темељ чоколаде агар, употреба и припрема



Тхе чоколадни агар то је чврста, обогаћена, неселективна и не-диференцијална подлога за културу. Користи се углавном за изолацију микроорганизама који захтевају нутриционистичку тачку, мада може расти било која врста бактерија.

Због тога се његова корисност повећава нарочито у сејању узорака који су нормално стерилни, као што је ЦСФ и зглобна течност. Иако је такође укључена у средства одабрана за сетву полимикробних узорака, али у тим случајевима потребно је додати антибиотике који инхибирају попратну флору.

Овај медиј има карактеристичну браон боју која је врло слична чоколади, па се одатле и зове. Препарат је веома сличан крвном агару, само у том случају крв мора бити загрејана да би се црвене крвне ћелије сломиле.

Његова припрема, као и крвни агар, веома је деликатна, јер се лако контаминира. Из тог разлога многи лабораторији радије стичу овај медијум већ припремљен од комерцијалних кућа које гарантују њихов квалитет.

Индек

  • 1 Фоундатион
  • 2 Усес
    • 2.1 Чоколадни агар припремљен са Цолумбиа агар
    • 2.2 Чоколадни агар припремљен са ГЦ базним агром (за гонококе)
    • 2.3 Чоколадни агар припремљен са Муеллер Хинтон агар
    • 2.4 Чоколадни агар припремљен са Тхаиер Мартин агар
  • 3 Припрема
    • 3.1 Прорачуни
    • 3.2 Измерити и растворити
    • 3.3 Стерилизација
    • 3.4 Агрегација крви
    • 3.5 Други начин припреме чоколадног агара без употребе крви
  • 4 Контрола квалитета
  • 5 Референце

Фоундатион

Овај медијум се састоји од базе агара богате хранљивим материјама и загрејане крви. Хемолиза црвених крвних зрнаца даје фактор Кс (хемин) и фактор В (НАД), који су неопходни за раст неких микроорганизама, као што је род. Хаемопхилус. Такође је веома корисно за изолацију Неиссериас сп.

Као и крвни агар, различити медији се могу користити као базни агар у зависности од потребе. Међу медијима који се користе су инфузија можданог срца и сојин агар триптицаза, иако се највише препоручују агар Цолумбиа, Муеллер Хинтон, ГЦ агар и Тхаиер Мартин агар..

Неке варијанте чоколадног агара укључују комерцијално доступан обогаћени додатак зван Исовиталек или Поливитек.

Ови додаци садрже витамин Б12, Л-глутамин, аденин, гуанин хидрохлорид, п-аминобензојева киселина, никотинамид аденин динуклеотид (НАД), тиамин пирофосфат, фери нитрат, тиамин хидрохлорид, цистеин хидрохлорид, Л-цистин и глукоза.

Важно је напоменути да је чоколадни агар обогаћенији од крвног агара, али не дозвољава посматрање узорака хемолизе..

Усес

Чоколадни агар припремљен са Цолумбиа агар

Овај медијум садржи дигестирани казеин и срчани панкреас, дигестирани месни пептид, натријум хлорид, агар, екстракт квасца и кукурузни скроб. Богат је витаминима, минералима и есенцијалним аминокиселинама.

Ова база са загрејаном крвљу идеална је за изолацију бактерија рода Неиссериа. С друге стране, ако се додатку за Бруцеллу дода у медијум, горе поменути микроорганизам се може изоловати. Резултати су побољшани употребом коњске крви.

Чоколадни агар припремљен са ГЦ базним агарима (за гонококе)

Овај медијум садржи пептоне, кукурузни скроб, монобазне и дибазичне пуфере, натријум хлорид и агар.

Већина комерцијално припремљених чоколадних агар презентација долази са овом базом и не садржи загрејану крв, већ синтетичку мешавину хемина и хемијског додатка фактора раста, витамина, минерала, амино киселина, фактора В и глукозе..

Чоколадни агар припремљен са Муеллер Хинтон агара

Користи се за испитивање антимикробне осјетљивости захтјевних микроорганизама, као што је Стрептоцоццус пнеумониае употребом 5% загрејане крви.

Такође служи за примарну изолацију Неиссериас и Хаемопхилус, али у посебном случају изолације Хаемопхилус пожељна је употреба коњске крви, јер је богат извор фактора Кс и В.

С друге стране, ако узорак који се сије, долази из нестерилног подручја, препоручује се додавање антибиотика како би се инхибирала нормална флора тог подручја..

Пример за респираторне узорке где се сумња на присуство бактерија из рода Хаемопхилус Бацитрацин се користи за инхибицију раста Стапхилоцоццус, Мицроцоццус, Стрептоцоццус и Сапрофитни Неиссериа.

У случају узорака гениталног шанкра, где се сумња Хаемопхилус дуцреии, Чоколадни агар припремљен на следећи начин успешно је коришћен: Муеллер-Хинтон агар са 5% чоколадне коњске крви, 1% Исовиталек обогаћивања и 3 μг / мл ванкомицина.

Чоколадни агар припремљен са Тхаиер Мартин агар

Овај медијум је посебан за изолацију Неиссериа гоноррхоеае. Мора да садржи антибиотике који инхибирају пратећу флору. Користи се јањећа крв.

Препаратион

Треба видети индикације за припрему базног агара који ће се користити. Налазе се на полеђини паковања дехидрираног медија. Они обично описују колико треба да се измери да би се припремио један литар медијума за културу.

У лабораторији можете припремити потребну количину, може бити више или мање од једног литра.

Израчуни

Правило од три је направљено да се израчуна колико треба да се измери да би се припремила жељена запремина. Пример:

Ако је за 1 литар потребно вагати 40 грама и лабораторији је потребно 800 мл, каже се:

1000 мл -40 гр

800 мл - Кс

Формула ће бити следећа:

Кс = 32 гр (маса за 800 мл).

Измери и раствори се

Настављамо да измеримо потребну количину и ставимо је у фиолу са водом.

Загрејте до умереног загревања и лагано мешајте са ротационим покретима док се дехидрирани медијум потпуно не раствори, остављајући да прокува 1 минут.

Стерилизе

Фиола се уноси у аутоклав да би се медијум стерилизовао на 121 ° Ц током 20 минута.

Агрегат крви

Када напустите аутоклав оставите да се одмара све док температура медија не буде приближно између 56 и 70 ° Ц да би се крв ставила и мешала док се средина не претвори у смеђу боју..

Ако желите да додате додатке, ово је време да то урадите. Затим мешајте и послужите 20 мл у сваку стерилну Петријеву посуду.

Цела процедура се мора извести у ламинарном поклопцу или око Бунсен горионика.

Оставите да стоје док се не стврдне и држе у хладњаку.

Други начин за припрему чоколадног агара без употребе крви

Основни медијум је припремљен као што је горе описано, комерцијално добијени дехидрирани хемоглобин је растворен и стерилисан у аутоклаву.

Оба раствора су остављена да се охладе на 50 ° Ц, спојити и додати додатак. Мешати у асептичним условима и затим послужити у стерилним Петријевим посудама.

Контрола квалитета

Важно је да се крв стави на назначену температуру, јер је она идеална за лизирање црвених крвних зрнаца и истовремено одржава фактор В који је термосензитиван..

На површини агара не сме бити мехурића. Свака серија од 100 плоча треба инкубирати једну или две плоче у пећи на 37 ° Ц на 24 сата да би се проверила његова стерилност.

За најбоље резултате, чоколадни агар треба користити кратко након припреме.

Контролне бактеријске сојеве треба узети у лабораторију како би се процијенила ефикасност свјеже припремљене подлоге за раст главних захтјевних микроорганизама од клиничког значаја..

Референце

  1. Гарциа П, Паредес Ф, Фернандез дел Баррио М. (1994). Практична клиничка микробиологија. Универзитет у Цадизу, друго издање. УЦА Публицатион Сервице.
  2. Форбес Б, Сахм Д, Веиссфелд А. (2009). Микробиолошка дијагностика Баилеи & Сцотт. 12 ед. Аргентина Панамерицана С.А Уводник.
  3. Конеман Е, Аллен С, Јанда В, Сцхрецкенбергер П, Винн В. (2004). Микробиолошка дијагноза. (5. изд.). Аргентина, Уводник Панамерицана С.А..
  4. Лланес Р, Реиес А, Родригуез Ц, Гузман Д, Ллоп А. Могућност употребе основног културног медија ГЦ-Биоцен Агара у лабораторији за микробиологију. Рев Цубана Мед Троп,  2004; 56 (3): 237-238. Доступно на: сциело.слд.
  5. Википедиа цонтрибуторс. Цхоцолате агар. Википедиа, Тхе Фрее Енцицлопедиа. Децембар 17, 2018, 19:54 УТЦ. Доступно на: ен.википедиа.орг.