Вогес-Проскауер тестна основа, припрема и употреба



Тхе Вогес-Проскауер тест је биохемијски тест који се користи за идентификацију бактерија које припадају породици Ентеробацтериацеае. Посебно је корисно разликовати сојеве Есцхерицхиа цоли оф Клебсиелла и Ентеробацтер, између осталог.

Тест се изводи у течном културном средству званом метил црвени-Вогес Проскауер, познатији под акронимом РМ ​​/ ВП. Овај медијум се састоји од пуферираног полипептона, глукозе, дикалијум фосфата и дестиловане воде.

Тренутни РМ / ВП медиј је модификација Цларк и Лубс медијума, који је првобитно садржавао нижу концентрацију пептона и глукозе. Због тога је произведено мање јона водоника, потребних за позитивну Вогес-Проскауер реакцију.

Тест се заснива на способности микроорганизма да користи глукозу преко пута бутилен гликола и формира неутрални крајњи производ зван ацетоин, у присуству кисеоника и алкалног пХ..

У РМ / ВП медијуму, поред тога што је у стању да открије Вогес-Проскауер тест, може се открити и тест метил црвене боје..

Индек

  • 1 Фоундатион
    • 1.1 Основа Вогес-Проскауер теста
    • 1.2 Основа за развој теста и тумачења
  • 2 Припрема
    • 2.1 Средњи РМ / ВП
    • 2.2 Вогес А Реагенс
    • 2.3 Вогес Б Реагенс
  • 3 Поступак Вогес-Проскауер теста
    • 3.1 Развој теста
  • 4 Користите
  • 5 Контрола квалитета
  • 6 Референце

Фоундатион

Основа Вогес-Проскауер теста

Плурипептонас присутан у медијуму обезбеђује нутритивне захтеве неопходне за раст бактерија. Са своје стране, глукоза је главно једињење. Многе бактерије имају способност метаболизирања глукозе и формирања пирувичне киселине.

Пирувична киселина је средња тачка у метаболизму глукозе и одатле сваки микроорганизам може да се одвија различитим путевима. Неки ће формирати мешовите киселине, као што су млечна киселина, сирћетна киселина, мравља киселина и јантарна киселина, а друге ће формирати неутралне производе као што је 2,3-бутандиол.

Вогес-Проскауер тест открива способност микроорганизма да формира ацетил метил карбинол (ацетоин), међупроизвод 2,3-бутандиола у аеробним условима.

Ацетоин се редукује и формира 2,3-бутандиол, али ова реакција је реверзибилна, тако да ако се 2,3-бутандиол оксидује, формира се ацетоин. Стога је кисеоник неопходан.

Дикалијум фосфат је пуфер који пригушује смешу на пХ 6,9 ± 0,2..

Основа за развој теста и интерпретацију

Да би се демонстрирала реакција, развој се мора извести употребом два реагенса (Баррит реагенси), познатих као Вогес А и Вогес Б.

Вогес А је 5% раствор α-нафтола, а Вогес Б је 40% калијум хидроксидни препарат. Ако калијум хидроксид није доступан, може се заменити са 40% натријум хидроксидом.

Α-нафтол је катализатор који ће повећати интензитет боје реакције, што чини тест осјетљивијим. А-нафтол се увек мора прво додати, мешањем цеви тако да медијум дође у контакт са кисеоником. На овај начин присутан ацетоин се оксидује у диацетил, а 2,3-бутандиол се оксидује да би се формирао ацетоин, преносећи га у диацетил..

Овако ће се α-нафтол везати за диацетил, који је пак повезан са гванидинским нуклеусом присутним у аминокиселини аргинин, потоњи из плурипептонас..

Са своје стране, калијум или натријум хидроксид је одговоран за апсорпцију ЦО2 и реагују са пептонима. Ова реакција доводи до формирања ружичасто-лососове боје, која је јасно видљива након што је епрувета добро протресена.

Да би се бојање одвијало тренутно, исправне количине диацетила, пептона и а-нафтола морају да се мешају. Ако се то не догоди, пустите да се цијев одмори 15 минута прије интерпретације.

Обично је тест позитиван након 2 до 5 минута, када се може примијетити слаба ружичаста боја. Ако оставите у мировању 30 мин до 1 сат, интензитет боје ће бити максималан (тамно црвена).

Негативан тест ће бити видљив када је бујон жут. Након 1 сата, ако је тест негативан, може се формирати бакарна боја као резултат реакције калијум хидроксида на а-нафтол.

Препаратион

Средње РМ / ВП

Измерити 17 г дехидрираног медијума за културу и растворити у једном литру дестиловане воде. Оставите да одстоји 5 минута. Загрејати до кључања да се потпуно раствори. Послужите 3 до 4 мл у епрувете и стерилизујте у аутоклаву на 121 ° Ц током 15 минута.

Дехидрирана подлога за културу је беж, а припремљена подлога је светло амбер.

Крајњи пХ медијума је 6.9 ± 0.2.

Вогес А Реагент

Измерити 5 г α-нафтола и растворити у 50 мл етилног алкохола (апсолутно). Након тога наставите са додавањем етилног алкохола до 100 мл.

Реагенс Вогес Б

Измерити 40 г калијум хидроксида и растворити у 50 мл дестиловане воде у чаши. Стакло треба ставити у хладно водено купатило да би се контролисала температура, јер у време растварања препарат нагло расте.

Након што се раствор охлади, пребаци се у дипломирани балон и доведе се до 100 мЛ са дестилованом водом.

Процедура Вогес-Проскауер теста

За извођење Вогес-Проскауер теста, РМ / ВП бујон се инокулира са микроорганизмом који се испитује, од чисте културе од 18 до 24 сата.

Инокулум не би требао бити превише густ. Инкубира се на 35-37 ° Ц 24 до 48 сати, мада је понекад потребно неколико дана инкубације. Цован и Стеел верују да је 5 дана минимално време инкубације неопходно за откривање свих позитивних Вогес-Проскауер (ВП) врста из породице Ентеробацтериацеае.

Развој теста

Одвојите аликвот од 1 мЛ у епрувету и извршите развој на следећи начин: ставите 12 капи (0,6 мЛ) Вогес А реагенса и 4 капи (0,2 мЛ) Вогес Б. Помешајте да проветрите и оставите да стоји 5 - 10 минута пре извођења. Међутим, ако је тест још увек негативан, оставите га да стоји и посматрајте епрувету после 30 минута до 1 сата.

Појава ружичасто-црвене боје указује да је реакција Вогес-Проскауер позитивна. Ако је медијум жут, реакција је негативна.

Додавање програмера у наведеном редоследу и количини је од суштинског значаја за избегавање лажних негатива.

Усе

Вогес-Проскауер тест је користан за разликовање сојева Е. цоли које су ВП негативне, родова Клебсиелла, Ентеробацтер, Серратиа, међу којима су ВП позитивне.

Контрола квалитета

Контролни сојеви се могу користити за тестирање квалитета припремљеног медија. Есцхерицхиа цоли АТЦЦ 25922, Клебсиелла пнеумониае АТЦЦ 700603, Протеус мирабилис АТЦЦ 43071, Салмонелла типхимуриум анд Ентеробацтер цлоацае АТЦЦ 13047.

Очекивани резултати су позитивни за Вогес-Проскауер реакције К. пнеумониае и Е. цлоацае. Остали дају негативне реакције.

Референце

  1. Лабораториес Британиа. МР-ВП Медиум. 2015. Доступно на: ввв.британиалаб.цом
  2. Мицрокит Лабораториес М-Идент Вогес Проскауер. 2014. Доступно на: хттп://ввв.медиосцултиво.цом
  3. Мац Фаддин Ј. (2003). Биохемијски тестови за идентификацију бактерија од клиничког значаја. 3рд ед. Едиториал Панамерицана. Буенос Аирес Аргентина.
  4. Форбес Б, Сахм Д, Веиссфелд А. (2009). Микробиолошка дијагностика Баилеи & Сцотт. 12 ед. Едиториал Панамерицана С.А. Аргентина.
  5. Конеман Е, Аллен С, Јанда В, Сцхрецкенбергер П, Винн В. (2004). Микробиолошка дијагноза. 5тх ед. Едиториал Панамерицана С.А. Аргентина.