Темељ, припрема и употреба селенитног бујона



Тхе селенитни бујон То је селективни течни медијум за културу. Дизајнирао га је Леифсон за обогаћивање узорака на којима се сумња на присуство ентеропатогених бактерија из рода Салмонелла..

Овај медијум задовољава захтјеве Америчког удружења за јавно здравље (АПХА) и стога је прихваћен за истраживање присуства салмонеле у узорцима столице, урину, течној или чврстој храни, води, између осталог..

Хемијски састав који поседује фаворизује опоравак ових микроорганизама и заузврат инхибира раст других. Углавном је токсичан за већину бактерија које припадају породици Ентеробацтериацеае. Међутим, она такође омогућава опоравак сојева Схигелла и не инхибира раст Псеудомонас и Протеус..

Састављен је од анхидрованог натријум-селенита, анхидрованог натријум-фосфата, пептона и лактозе. Постоји и варијанта у коју се додаје цистин, отуда и његово име селенит-цистински бујон.

У овом тренутку, пожељна је употреба селенит-цистинске бујон, пошто се добија већи проценат опоравка салмонеле, еквивалентан оном који је примећен са другим селективним медијумима истог циља, као што је Тетратионатни натријумски бујон..

Индек

  • 1 Фоундатион
  • 2 Припрема
    • 2.1 - Селена
    • 2.2 - Припрема комерцијалног медија
    • 2.3 Варијантни селенит-цистински бујон
  • 3 Усес
  • 4 Сеедед
  • 5 Контрола квалитета
  • 6 Ограничења
  • 7 Референце

Фоундатион

Пептони садржани у бујону служе као хранива за правилан развој микроорганизама. Сојеви салмонеле користе пептоне као извор азота, витамина и аминокиселина.

Лактоза је ферментабилни угљикохидрат, док је натријум селенит инхибирајућа супстанца која успорава раст Грам позитивних бактерија и већину бактерија присутних у цревној флори, посебно породице Ентеробацтериацеае. Натријум фосфат је пуфер који стабилизује пХ медијума.

У случају варијанте селенитне јухе која садржи Л-цистин, ово додатно једињење је редукциони агенс који минимизира токсичност селенита, повећавајући опоравак салмонеле.

Препаратион

-Селените бујон

Ако имате компоненте смјесе, можете извагати:

4 г анхидрованог натријум хидроген селенита.

10 г анхидрованог натријум фосфата.

5 гр пептонас.

4 гр лактозе.

Растворите једињења у 1 литри стерилне дестиловане воде. Може се лагано загревати да би се растворио у целини.

Неке лабораторије излажу медијум током 10 минута течном паром да га стерилизују, јер се аутоклав не би требало користити. Ако је медијум стерилисан, може се чувати у фрижидеру док се не употреби.

Такође се може припремити без стерилизације и сервирања директно од 10 до 15 мл у стерилне епрувете.

У овом случају, треба га оставити да се одмара и користити одмах. Пошто медијум није стерилан, не може се чувати у фрижидеру за каснију употребу.

-Припрема комерцијалног медија

Ако је комерцијални медијум доступан, 23 г дехидрираног медијума се измери и раствори у једном литру стерилне дестиловане воде. Кратко се загрејте да бисте завршили растварање. Не стерилисати у аутоклаву. Послужите асептично 10 или 15 мл у стерилним епруветама.

Крајњи пХ медијума треба да буде 7.0 ± 0.2.

Треба напоменути да је боја дехидрираног медија беж, а препарат је бистар и провидан ћилибар.

Вариант селенит-цистински бујон

Садржи иста једињења селенитне јухе, али се додаје 10 мг цистина. Остатак поступка је потпуно исти као што је горе описано.

Усес

Овај медијум је специјалан за употребу у епидемиолошким студијама, у случајевима када болест није у акутној фази, асимптоматским пацијентима или здравим носиоцима..

Изолација рода Салмонелла је обично тешка, јер се обично утврди да оне контаминирају узорке на оскудан начин. Бити у малим количинама лако се преклапа растом других бактеријских родова који се налазе у већој количини.

С друге стране, сировина са којом се обрађена храна обрађује често је изложена топлини, процесима дехидрације, употреби дезинфицијенса, зрачења и конзерванса, између осталог..

Према томе, салмонеле присутне у сировини се лоше третирају подношењем производа горе поменутим индустријским процесима. Исто тако, у случају клиничких узорака као што су фецес, сојеви могу бити слаби ако долазе од пацијената који су третирани антибиотицима..

Према томе, сваки узорак у коме постоји сумња на присуство салмонеле мора бити претходно обогаћен у лактозном бујону, а затим обогаћен селенитним бујоном да би се оптимизовао његов опоравак у селективним медијумима, као што је СС агар, ксилозни агар, лизински деоксихолат (КСЛД) ), ентерички Хектоен агар (ХЕ) и зелено-свијетли агар, између осталих.

Совн

За узорке столице узети 1 г узорка и суспендовати у епрувети са 10 до 15 мл селенитне јухе. Ако је столица течна, узмите 1 мл и суспендујте у бујону. За ректалне брисеве, испразните материјал бриса у бујон.

У узорцима чврсте хране узети 1 гр и суспендовати у селенитном бујону.

У течним намирницама у једнаким дијеловима мијешајте са селенитом у двострукој концентрацији.

За центрифугу узорака урина, одбаците супернатант, узмите сав седимент и суспендујте га у селенитном бујону.

Бујони су инкубирани на 37 ° Ц током 24 часа инкубације. Бактеријски раст је доказан мутноћом. Додатна епрувета по узорку такође може бити укључена да се инкубира на 42 ° Ц. Затим се сеју селективни чврсти медији из селенитног бујона.

Контрола квалитета

За контролу стерилности, селенитни бујон из сваке шарже без инокулације се инкубира на 37 ° Ц током 24 сата. Очекује се да нема замућености или промене боје медијума.

Да би се контролисало добро функционисање медијума, могу се користити познати сојеви, као што су:

Салмонелла ентеритидис АТЦЦ 13076, Салмонелла типхимуриум АТЦЦ 14028,  Салмонелла цхолераесуис АТЦЦ 12011, Есцхерицхиа цоли АТЦЦ 25922 и Протеус мирабилис АТЦЦ 43071.

Очекивани резултати су:

  • За прва три бактеријска соја раст мора бити задовољавајући.
  • То Есцхерицхиа цоли делимична инхибиција.
  • За Протеус умерен раст.

Ограничења

Средњи селенитни бујон је токсичан за људску кожу, стога треба избегавати директан контакт.

Референце

  1. Флорес-Абукапкуи Ј, Пуц-Францо М, Хередиа-Наваррете М, Вивас-Росел М, Францо-Монсреал Ј. Поређење између медијума културе натријум селенита и тетратионата натријума, оба инкубирана на 37 ° Ц и 42 ° Ц изолација Салмонелла столица носача столица. Рев Биомед 2003; 14 (4): 215-220
  2. Лабораториес Британиа. Селенито Цалдо. 2015. Доступно на: британиалаб.цом
  3. Неоген Лабораториес Селенито бујон Доступно на: фоодсафети.неоген.цом
  4. Гонзалез -Педраза Ј, Переира-Санандрес Н, Сото -Валела З, Хернандез-Агуирре Е, Вилларреал-Цамацхо Ј. Микробиолошка изолација Салмонелла спп. и молекуларне алате за његову детекцију. Здравство, Барранкуилла 2014; 30 (1): 73-94. Доступно на: хттп://ввв.сциело.орг.
  5. Форбес Б, Сахм Д, Веиссфелд А. (2009). Микробиолошка дијагностика Баилеи & Сцотт. 12 ед. Едиториал Панамерицана С.А. Аргентина.