Темељ за употребу агара, употреба и припрема

Тхе крвни агар то је обогаћена чврста средина, диференцијална али не селективна. Користи се за опоравак и раст великог броја микроорганизама из клиничких узорака или субкултура.

Класични крвни агар треба укључити у сетву већине клиничких узорака примљених у лабораторију; осим узорака столице где није корисно, осим ако није припремљено са одређеним модификацијама.

Овај медијум културе се у основи састоји од обогаћеног базног агара и 5% крви. База агара може варирати у складу са потребама, али ће углавном бити састављена од пептона, аминокиселина, витамина, екстракта меса, натријум хлорида, агара, између осталог.

Што се тиче крви, обично је потребно имати контакт са биотеријумом да би се добила крв од животиња, као што су овце, зец или коњ. Међутим, то није увијек могуће и понекад се користи људска крв.

Медијум за крвни агар се може припремити у лабораторији или се може купити спреман за компаније које су му посвећене. Припрема овог медија је једна од најделикатнијих, свака непажња у њеној припреми резултира контаминираном шаржом.

Због тога треба предузети све могуће мере предострожности и на крају да се изврши контрола квалитета инкубације на 37 ° Ц 1 плочи за сваких 100 који се припремају.

Индек

• 1 Фоундатион
• 2 Усес
  • 2.1 Избор крвне групе
  • 2.2 Избор типа базног агара
  • 2.3 Употреба крвног агара према основном медију који се користи за припрему
• 3 Припрема
  • 3.1 Измерити и растворити
  • 3.2 Стерилизујте
  • 3.3 Агрегација крви
  • 3.4. Улијте у Петријеве посуде
• 4 Референце

Фоундатион

Већ је поменуто да крвни агар има карактеристику да је обогаћен, диференцијални и неселективни медијум. Подлога сваког од ових својстава је објашњена у наставку.

Крвни агар је обогаћени медиј зато што има као главни адитив 5-10% крви на бази агара. Оба једињења садрже много хранљивих састојака и ово својство омогућава да већина бактерија које се обрађују расту у њој.

Тај раст се одвија без ограничења; из тог разлога није селективан. Међутим, ако се у овај медиј додају једињења која спречавају раст неких микроорганизама и фаворизују раст других, она постаје селективна. То је случај ако се додају одређене врсте антибиотика или антифунгала.

Исто тако, крвни агар је диференцијална подлога, јер омогућава разликовање 3 врсте бактерија: бета-хемолитика, алфа-хемолитика и гама-хемолитика..

Бета-хемолитике су оне које имају способност лизирања или потпуног разбијања црвених крвних зрнаца, формирајући јасан хало око колонија, стварајући тако ß или β хемолизу - хемолиза и микроорганизми се називају ß-хемолитиком.

Примери ß-хемолитичких бактерија су Стрептоцоццус пиогенес и Стрептоцоццус агалацтиае.

Алфа-хемолитике су оне које обављају парцијалну хемолизу, где се хемоглобин оксидира у метхемоглобин, стварајући зеленкасто обојење око колонија. Овај феномен је познат као хемолиза α или α-хемолиза и бактерије су класификоване као α-хемолитик.

Примери α-хемолитичких бактерија су Стрептоцоццус пнеумониае и Стрептоцоццус групе вириданс.

Коначно, постоје бактерије које се називају гама-хемолитички или не-хемолитички. Они расту на агару без стварања промена на њему, ефекат познат као γ-хемолиза, а микроорганизми су γ-хемолитички.

Пример γ-хемолитичких бактерија: неки сојеви Стрептоцоццус групе Д (Стрептоцоццус бовис и Ентероцоццус фаецалис).

Усес

Медиј за културу агар крви је један од најчешће коришћених у микробиолошкој лабораторији.

Међу микроорганизмима који су способни да расту на медијуму за крвни агар су: строге, факултативне, микроаерофилне, анаеробне, грам-позитивне или грам-негативне аеробне бактерије, брзо растуће или споро растуће бактерије.

Неке бактерије које су захтјевне или узнемирујуће са прехрамбене тачке гледишта, као и гљивице и квасци, такођер расту. Исто тако, корисно је субкултивирати или реактивирати сојеве који су метаболички врло слаби.

Међутим, избор крвне групе и базног агара ће варирати у зависности од вероватног микроорганизма који се сумња на опоравак и употребе плака (култура или антибиограм)..

Избор крвне групе

Крв може бити јагњетина, зец, коњ или човек.

Највише се препоручује јањетина крв, уз неке изузетке. На пример, да би се изоловале врсте Хаемопхилус, где је препоручена крв коњ или зец, будући да јањетина крв има ензиме који инхибирају фактор В.

Најмање препоручено је људско биће, али је најчешће коришћено, можда зато што је најлакше добити. 

Крв мора бити дефибринирана, добијена без адитива и од здравих животиња. За употребу људске крви треба имати на уму неколико фактора:

Ако крв долази од особа које су претрпјеле бактеријске инфекције, имат ће специфична антитијела. Под овим условима, раст неких бактерија ће вероватно бити инхибиран.

Ако се добије из банке крви, садржи цитрат и могуће је да се одређене бактерије не развијају у његовом присуству. С друге стране, ако крв долази од пацијената који узимају антибиотике, раст осјетљивих бактерија може бити инхибиран.

А ако је крв од особе са дијабетесом, вишак глукозе омета правилан развој узорака хемолизе.

Избор типа базног агара

Основни агар који се користи за припрему крвног агара може бити веома широк. Међу њима су: хранљиви агар, агар за инфузију мозга, триптиказа сојин агар, Муеллер Хинтон агар, Тхаиер Мартин агар, Цолумбиа агар, Бруцелла агар, Цампилобацтер агар итд..

Употреба крвног агара према основном медију који се користи за његову припрему

Нутриент агар

Ова база је најмање коришћена, јер ће на њој расти углавном незахтевне бактерије, као што су цријевни бацили, Псеудомонас сп, С. ауреус, Бациллус сп, између осталог. Не препоручује се изоловати Стрептоцоццус.

Агар за инфузију срчаног мозга (БХИ)

Једна је од најчешће коришћених као основа крвног агара, јер има неопходне хранљиве материје за раст већине бактерија, укључујући Стрептоцоццус сп и друге захтевне бактерије. Иако није прикладно посматрати обрасце хемолизе.

Са овом базом се обично користи јањећа крв.

Могу се припремити и варијанте крвног агара, где се додају друга једињења да би се изоловали одређени микроорганизми. На пример, агар за инфузију мозга срца допуњен крвљу зеца, цистином и глукозом служи за изолацију Франциселла туларенсис.

Док је цистински телурит користан за изолацију Цоринебацтериум дипхтериае. Можете користити људску или јагњећу крв.

Прво ће бета-хемолиза изгледати као уски ореол, док ће други бити много шири.

Исто тако, ова база заједно са бацитрацином, кукурузним скробом, коњском крви и другим додатцима за обогаћивање (ИсоВиталеКс), користи се за изолацију рода Хаемопхилус сп из респираторних узорака.

Такође, ако додате комбинацију антибиотика хлорамфеникол - гентамицин или пеницилин - стрептомицин са коњском крвљу, она је идеална за изолацију захтевних патогених гљива, чак и са већим приносом од Сабоурауд глукозног агара. То је посебно корисно у изолацији Хистопласма цапсулатум.

Триптиве соибеан

Ова база је највише препоручена за боље посматрање узорка хемолизе и извођење дијагностичких тестова као што су таксони оптокин и бацитрацин. То је класични крвни агар који се користи рутински.

Са овом базом можете припремити и специјални крвни агар Цоринебацтериум дипхтериае, са телистровим цистином и Јагњећа крв.

Исто тако, комбинација овог агара са јањећом крвљу и канамицином-ванкомицином је идеална за раст анаеробних бактерија, посебно Бацтероидес сп.

Агар Муеллер Хинтон

Ова база допуњена крвљу користи се за обављање антибиограма захтјевних микроорганизама, као што је Стрептоцоццус сп.

Такође је корисна за изолацију бактерија Легионелла пнеумопхила.

Агар Тхаиер Мартин

Овај медијум је идеалан као база за крвни агар када се сумња на род Неиссериа, посебно Неиссериа менингитидис, синце Н. гоноррхоеае не расте на крвном агару.

Такође служи и за тестирање осетљивости Неиссериа менингитидис.

Агар Цолумбиа

Ова база је одлична за сејање узорака гастричних биопсија у потрази за Хелицобацтер пилори.

Медиј се припрема додавањем 7% јањеће крви дефибринираном антибиотицима (ванкомицин, триметоприм, амфотерицин Б и цефсулодин) да би се ограничио раст других врста бактерија које могу бити присутне.

Ова иста база надопуњена људском или јањећом крвљу, налидиксичном киселином и колистином је корисна за изолацију Гарднерелла вагиналис. Такође је идеалан за процену антимикробне осетљивости на антибиотике истог микроорганизма.

Осим тога, користи се за припрему крвног агара за узгој анаеробних бактерија, додавање аминогликозида и ванкомицина.

Ова база омогућава нам да правилно посматрамо обрасце хемолизе.

Бруцелла Агар

Овај медиј који се користи као основа крвног агара заједно са додатком витамина К је идеалан за узгој анаеробних бактерија. У овом случају препоручује се употреба јањеће крви.

Цампилобацтер агар

Агар Цампилобацтер са 5% овчије крви и 5 антибиотика (цефалотин, амфотерицин Б, триметоприм, полимиксин Б и ванкомицин) је медиј који се користи за изолацију Цампилобацтер јејуни у узорцима столице.

Препаратион

Свака комерцијална кућа доводи на полеђину паковања упутства за припрему литре медијума за културу. Одговарајући прорачуни могу бити направљени за припрему жељене количине, у складу са одабраним базним агром.

Измери и раствори се

Основни агар долази дехидриран (прах), тако да се мора растворити у дестилованој води подешеној на пХ 7.3.

Количина која је назначена одабраним базним агаром је измерена и растворена у одговарајућој количини воде у фиоли, затим загрејана до умерене топлоте и помешана са ротирајућим покретима док се сав прах не раствори..

Стерилизе

Након растварања, стерилисати у аутоклаву на 121 ° Ц током 20 минута.

Агрегат крви

Када напустите аутоклав, пустите да се фиола охлади док температура не осцилира између 40 и 50 ° Ц; је температура коју људска кожа подржава и истовремено агар још није очврснуо.

За то, фиола се додирује руком и ако је топлота подношљива, идеална је температура да се дода одговарајућа количина дефибриниране крви (50 мл по литру агара). Лагано измешати да се хомогенизује.

Пролазак агрегата крви је од пресудног значаја, јер ако се то уради када је медиј јако вруће, црвене крвне ћелије ће се сломити и медиј неће служити за посматрање хемолизе..

Ако се дода сувише хладно, стварају се грудвице и површина медија неће бити глатка да би флаута исправно направила.

Сипајте у Петријеве посуде

Послужите у стерилним Петријевим посудама одмах након хомогенизације крви. У сваку Петријеву посуду сипа се приближно 20 мл. Ова процедура се изводи у ламинарном поклопцу или у близини упаљача.

Када послужите крвни агар у Петријевим посудама, не би требало да остану ваздушни мехурићи на површини плоче. Ако се то догоди, пламен Бунсен пламеника се брзо прелази преко плоче да би их елиминисао..

Плоче су остављене да се очврсну и складиште у фрижидеру (2-8 ° Ц) преокренутом до употребе. Пре употребе крвне таблице агара треба да се каље (нека се узме собна температура) да се сије.

Припремљене плоче трају приближно 1 недељу.

Референце

1. Баиона М. Микробиолошки услови за узгој Хелицобацтер пилори. Рев Цол Гастроентерол 2013; 28 (2): 94-99
2. Гарциа П, Паредес Ф, Фернандез дел Баррио М. (1994). Практична клиничка микробиологија. Универзитет у Цадизу, друго издање. УЦА Публицатион Сервице.
3. "Агар крв." Википедиа, Тхе фрее енцицлопедиа. 10 Дец 2018, 14:55 УТЦ. Дец 27 2018, 01: 49 ен.википедиа.орг.
4. Форбес Б, Сахм Д, Веиссфелд А. (2009). Микробиолошка дијагностика Баилеи & Сцотт. 12 ед. Аргентина Панамерицана С.А Уводник.
5. ЦЕДИВЕТ Лабораторијски ветеринарски дијагностички центар. Гуатемала Доступно на: тренса.цом.
6.  Конеман Е, Аллен С, Јанда В, Сцхрецкенбергер П, Винн В. (2004). Микробиолошка дијагноза. (5. изд.). Аргентина, Уводник Панамерицана С.А..