Баирд Паркер Агар темељ, припрема и употреба

Тхе Баирд Паркер агар то је чврсти, селективни и диференцијални медијум културе. Настао је 1962. године за откривање и коагулазно позитивно бројање стафилокока (Стапхилоцоццус ауреус).

Састоји се од казеина, хидролизата панкреаса, екстракта меса, екстракта квасца, литијум-хлорида, глицина, натријум-пирувата, калијум-телурита, емулзије агара и жумањка јајета..

Баирд Паркер агар се заснива на способности С. ауреус смањења телурита и производње лецитиназе. Оба својства стварају колонију са специфичним карактеристикама за ову врсту. Због тога нуди велику ефикасност у откривању овог микроорганизма.

Типичне колоније С. ауреус они су црне или тамно сиве боје, безбојне границе и јасног халоа који их окружује, диференцирајући се од осталих микроорганизама. Овај патоген се може наћи у клиничким узорцима, водама, козметици и сировим или куваним намирницама.

Његова дијагноза или детекција је веома важна, због разноликости патологија које производи, као што су тровање храном, синдром опелене коже, синдром токсичног шока, апсцеси, менингитис, септикемија, ендокардитис, између осталих..

Индек

• 1 Фоундатион
  • 1.1
  • 1.2 Селективно
  • 1.3 Диференцијал
• 2 Припрема
  • 2.1 Емулзија жумањка јаја
  • 2.2 Калијум-телурит са 1% в / в
  • 2.3 Припрема медијума за културу
• 3 Користите
  • 3.1 Клинички узорци
  • 3.2 Узорци хране
  • 3.3 Узорци воде
• 4 Контрола квалитета
• 5 Препоруке
• 6 Референце

Фоундатион

Нутритивна моћ

Хидролизат казеин панкреаса, екстракт меса и екстракт квасца су извори нутријената, витамина и минерала неопходних за општи развој микроба, док су пируват и глицин једињења која погодују специфичном расту Стапхилоцоццус ауреус.

Селективно

Баирд Паркер агар је селективан јер садржи супстанце које спречавају раст пратеће флоре, а истовремено промовишу развој С. ауреус. Једињења која инхибирају су литијум хлорид и калијум телурит.

Дифферентиал

То значи да се може разликовати С. ауреус остатка коагулаза негативних стафилокока. С. ауреус има способност да редукује телурит до црног металик слободног телурума, формирајући црне или тамно сиве колоније.

Исто тако, жуманце јаја обезбеђује супстрате да докажу присуство ензима лецитиназе и липазе. С. ауреус то је позитивна лецитиназа и због тога ће се око колоније посматрати јасан хало, што указује да је лецитин хидролизован.

У том смислу, појављивање у овом агару црних или тамно сивих колонија светлих са светлим ауреолом указује на присуство С. ауреус. 

Ако се формира зона таложења, индикативно је да постоји активност липазе. Неки сојеви С. ауреус они су позитивна липаза и други негативни.

У случају да С. ауреус Ако је липаза позитивна, непрозирна зона ће бити посматрана око црне или тамно сиве колоније, а затим ће бити очишћени хало због деловања лецитиназе..

Колоније бактерија које нису С. ауреус у овом медију ће се развити безбојне или смеђе колоније, без хало око.

Атипичне црне колоније се такође могу посматрати са или без безбојне границе, али без јасног халоа. Ове колоније не треба узети у обзир, оне не одговарају С. ауреус.

Препаратион

Емулзија жумањка јаја

Узмите свјеже пилеће јаје, добро га оперите и ставите 2 до 3 сата у 70% алкохол. Затим, јаје се отвара асептично и бјелањак се пажљиво одваја од жуманце. Након тога се узме 50 мл жумањака и помеша са 50 мл стерилног физиолошког раствора.

Калијум-телурит са 1% в / в

Неке комерцијалне куће продају 1% калијум телурит спреман за употребу. Додаје се у медијум пре него што се медијум очврсне.

За припрему овог раствора у лабораторији извагати 1,0 г калијум телурита и растворити у делу воде. Затим се количина воде заврши до 100 мл. Раствор мора бити стерилисан методом филтрације.

Припрема медијума за културу

Измерити 60 г дехидриране подлоге и растворити у 940 мл дестиловане воде. Оставите смјесу у мировању отприлике 5 до 10 минута.

Загрејте га мешањем медија често да бисте побољшали процес растварања. Пусти да прокува минут. Стерилисати у аутоклаву на 121 ° Ц током 15 минута.

Пустите да стоји док не достигне температуру од 45 ° Ц и додајте 50 мл емулзије жуманце јајета и 10 мл 1% талурита. Добро промешати и послужити 15 до 20 мл на стерилним Петријевим посудама.

Оставити да се стврдне, наручити обрнуте плакете и чувати у фрижидеру до употребе.

Коначни пХ припремљеног медија треба да буде 6.8 ± 0.2.

Пре постављања узорка, сачекајте да плоча преузме температуру околине. Сијајте плоче траговима или сијањем на површину са Дригалском шпатулом.

Боја дехидрираног медија је свијетло смеђа, а боја припремљеног медија је свијетло јантар.

Усе

Клинички узорци

Клинички узорци се засијају директно испуштањем дела материјала на једном крају плоче, а одатле се исцрпљује. Инкубирајте 24 до 48 сати на 35-37 ° Ц.

Узорци хране

Измерити 10 г узорка хране и хомогенизовати у 90 мл 0,1% пептониране воде, од тамо се припремити разблажења, ако је потребно. Инокулирајте плоче у трипликату са 0,3 мл припремљених раствора, и посијајте на површину са Дригалски спатулом. Инкубирајте 24 до 48 сати на 35-37 ° Ц.

Ова методологија омогућава бројање типичних добивених колонија и идеална је у присуству С. ауреус изнад 10 ЦФУ по г / мл узорка.

Ако сумњате да је износ С. ауреус мали је или има доста пратеће флоре, предлаже се да се узорак обогати у триптиказном сојином бујону са 10% НаЦл и 1% натријум пирувата. Ово ће погодовати расту С. ауреус и инхибираће развој пратеће флоре. Цеви које су мутне ће бити засијане на Баирд Паркер агару.

Узорци воде

У вакуумском филтрационом систему и стерилизованом, 100 мл воде се филтрира, а затим се микропорозна мембрана од 0,4 микрона уклони стерилном стезаљком и стави на Баирд Паркер плочу. Инкубирати 24 до 48 сати на 35-37 ° Ц. Ова техника омогућава бројање типичних колонија С. ауреус.

Контрола квалитета

За процену квалитета Баирд Паркер агара, могу се користити познати сојеви, као што су Стапхилоцоццус ауреус АТЦЦ 25923, Стапхилоцоццус ауреус АТЦЦ 6538, Стапхилоцоццус епидермидис АТЦЦ 12228, Есцхерицхиа цоли АТЦЦ 25922 или Протеус мирабилис АТЦЦ 43071.

У случају сојева С. ауреус Познато је да АТЦЦ смањује телурит, а они су позитивна липаза и лецитиназа. Због тога мора постојати задовољавајући развој и расти конвексне колоније са црним средиштем и безбојном ивицом, са непрозирним ауреолом, а други хало више спољни..

С друге стране, С. епидермидис слаб развој се очекује у овом медију, са сивосмеђим до црним колонијама, без јасног ореола.

То Е. цоли и П. мирабилис очекује се да ће бити потпуно или делимично инхибирано. У случају узгоја, смеђе колоније ће се развити без непрозирне зоне, нити јасног халоа.

Препоруке

-Медиј се не смије загријавати након додавања телурита и жуманце.

-Припрема емулзије жумањка јајета и њено додавање у медијум је веома рањив корак контаминације. Изузетна пажња мора бити предузета.

-Ако постоје присуство типичних колонија С. ауреус Мора се потврдити постављањем коагулазног теста на наведени сој.

-Ако постоје сумњиви резултати са коагулазом, морају се поставити други потврдни тестови.

-Пазите да не збуните присуство типичних колонија С. ауреус са атипичним колонијама црне боје.

Референце

1. Википедиа цонтрибуторс. Баирд-Паркер агар. Википедиа, Тхе Фрее Енцицлопедиа. 15 марта 2017, 19:36 УТЦ. Доступно на: википедиа.орг/ Приступљено 18. фебруара 2019. године.
2. БД Лабораториес. Баирд Паркер Агар. 2006. Доступно на: бд.цом
3. Лабораториес Британиа. База Баирд Паркер агара. 2015. Доступно на: британиалаб.цом
4. Францисцо Сориа Мелгуизо Лабораториес. 2009. Баирд Паркер Агар. Доступно на: хттп://ф-сориа.ес/Информ
5. Лабораториес Британиа. Калијум телурит. 2015. Доступно на: британиалаб.цом
6. Аларцон-Лавин М, Оиарзо Ц, Есцудеро Ц, Церда-Леал Ф, Валензуела Ф. Стапхилоцоццус ауреус ентеротоксигени тип А, у назофарингеалном размазу код особа које рукују храном. Рев Мед Цхиле 2017; 145: 1559-1564
7. Венецуелански стандард Цовенин 1292-89. (1989). Храна Изолација и бројање Стапхилоцоццус ауреус. Доступно у:сенцамер.гоб.ве