Припрема медија културе од чега се састоји, циљеви и кораци

Тхе припрему медија за културу То је рутинска методологија која се користи у лабораторијама за раст жељених микроорганизама. Медији за културу су чврсти, течни или полукрути препарати који поседују све хранљиве материје неопходне за развој микробне популације.

Уопштено, средства за раст микроорганизама су богата протеинима и аминокиселинама и обично садрже неку компоненту која фаворизује раст организма који желите да проучавате, као што су витамини, крв, серум, између осталих..

Не постоји општи или универзални медијум за културу, јер његов састав варира у складу са потребама микроорганизма од интереса. Неке бактерије се могу развити у било ком медију за културу, али друге имају посебне захтеве.

Индек

• 1 Од чега се састоји??
  • 1.1 Агар
  • 1.2 Флуидс
  • 1.3 Екстракти
  • 1.4 Пептони
  • 1.5 Амортизери
• 2 Циљеви
• 3 Врсте медија
  • 3.1 На основу свог састава
  • 3.2 На основу типа микроорганизма
• 4 корака
• 5 Референце

Од чега се састоји??

Микроорганизми, као што су гљивице и бактерије, не могу се проучавати појединачно због њихове мале величине. Према томе, оне се морају узгајати на вјештачки начин који омогућава значајан пораст популације.

На пример, ако желимо да проучавамо бактерије морамо да им обезбедимо праве услове да би се могли размножавати и формирати колонију (која се може посматрати голим оком)..

Припрема медијума за културу варира у зависности од типа микроорганизма који се жели култивисати. Прије припреме потребно је знати основне прехрамбене потребе тијела.

Затим ће се описати најчешће компоненте које се користе у медијима културе како би имале опћу идеју о њиховој припреми:

Агар

Користи се у усјевима као гелирајуће средство и додаје се у потрази за чврстим или получврстим медијем. Први агенс за учвршћивање коришћен у припреми медија је желатин, али је 1883. године агар уведен у свет бактериологије од стране В. Хессе..

Бактериолошки агар има као своју главну компоненту полисахарид комплексних грана екстрахованих из алги. Ово једињење се користи као згушњивач за уобичајене намирнице као што су сладолед и џемови.

То је веома вриједан елемент у микробиологији из неколико разлога. Углавном зато што се микроорганизми не могу разградити, тече на температури од 100 ° Ц и остају у течном стању до 45 ° Ц или мање..

У случају да желите припремити чврсту подлогу, концентрација агара би требала бити око 1,5%, док би полу-круте твари требале бити припремљене од 0,3 до 0,5%.

Флуидс

Узгој патогених организама захтева телесне течности тако да се могу развијати онако како би то чинили у свом природном окружењу. Из тог разлога, додаје се цела или дефибрилована крв. Течност се екстрахује из здраве животиње и након стерилизације дода се у медијум за културу.

Екстракти

Добијају се из различитих животињских делова (као што су месо или јетра) или поврћа (семенке) и обрађују да би се добио чврсти концентрат у облику пасте или праха. Најчешћи су квасац, слад и месо.

Пептони

Ова органска једињења се добијају ензимском или хемијском хидролизом животињских или биљних ткива. Сврха је да се дода садржај богат аминокиселинама, које су основне јединице протеина.

Амортизери

Буфери или пуфер системи избегавају изненадне промене пХ и помажу у одржавању оптималног распона који тело толерише.

Већина организама се може правилно развијати на пХ 7, иако неке бактерије преферирају алкалне медије. Међутим, постоје бактерије које су отпорне на варијације пХ између вредности 6 и 9.

Код врста осетљивих на пХ, оштећење се не ствара прекомерном количином водоника или хидроксилних јона, већ повећањем слабих киселина или база које могу продрети у ћелију.

Такође, додају се индикатори да се пХ прати и избјегавају одступања узрокована ферментацијом или другим процесима.

Циљеви

Главни циљ при припреми медијума за културу је да се додају све неопходне компоненте како би се омогућио успешан развој организма који жели да буде изолован. Да би се постигао жељени медиј, мора се идентификовати најефикаснија комбинација компоненти и хранљивих материја.

И припрема и складиштење медија су критични за обезбеђивање успешног раста, пошто ови кораци зависе од састава животне средине и доступности хранљивих материја.

Мора се узети у обзир да је култивација микроорганизама задатак на који утиче неколико фактора који су изван средине културе, као што је интензитет примљеног светла, температура и ниво киселости или алкалности подлоге. Стога се свака од ових варијабли мора узети у обзир.

Врсте медија

На основу свог састава

На основу свог састава постоје три главне врсте усева: природна или емпиријска, полусинтетичка и дефинисана синтетичка или хемијска средства.

Природно окружење

У природном окружењу тачан састав је непознат. Ово укључује састојке као што су млеко, разређена крв, сокови од поврћа, екстракти и инфузије меса и пептона. Из економских разлога често се додају ниске цене компоненти као што су екстракт соје, сурутка, меласа итд..

Полусинтетички медији

Зове се полусинтетички медиј ако је састав делимично познат. Било који медиј који садржи агар постаје полусинтетички медијум.

Међу њима су папа декстроза агар, цзапек-док агар, овсени агар, пептонски агар, међу осталим примерима.

Синтетичка или хемијска средина

У овом случају, састав медија - у смислу количине угљеника, азота, сумпора, фосфора и било којих других извора фактора раста - је потпуно познат. То је веома корисно ако желите да добијете поновљиве резултате за друге истраживаче.

За такозване "микроорганизме са посебним захтјевима раста" потребно је додати потребне компоненте. Пример овог типа су Лацтобациллус.

На основу типа микроорганизма

Слично томе, постоји још једна класификација за медијуме културе заснована на типу микроорганизама који могу расти у њему. Слиједећи овај принцип, имамо сљедећа опћа средства обогаћивања, селективности и диференцијала. Сваки од њих је описан у наставку:

Општа средства

Они признају развој великог броја микроорганизама. Ако било који организам треба посебне услове за свој раст, неће се моћи успешно развијати у овој врсти усева.

Обогаћивање значи

Средства за обогаћивање погодују расту одређене врсте микроорганизама, али није додата ниједна супстанца која би спречила раст других врста микроба у њему..

Селективни медији

Они траже специфичан раст микроорганизма, називају га гљивице, бактерије, протозое, између осталих. Да би се то постигло, они спречавају развој других.

Да би се постигао овај циљ могу се додати смртоносне хемијске супстанце за велику групу микроорганизама и безопасне за организам од интереса или додавање извора енергије који се могу само асимиловати траженим микробима..

Селективни медији се користе приликом узимања медицинских узорака како би се узгојио патогени микроорганизам. Овде је неопходно погодовати расту патогена и инхибирати развој нормалне микробне флоре код пацијента.

На пример, бизмут сулфитни агар не дозвољава раст грам-позитивних бактерија и великог броја бактерија које се налазе у гастроинтестиналној шупљини. Због тога се користи за гајење грам-негативних бактерија које изазивају тифус, Салмонелла типхи у узорцима фекалија.

Дифферентиал медиа

Овај тип користи неку дијагностичку карактеристику организма од интереса (посебности у његовом метаболизму, на пример) да би могао да их идентификује против друге врсте која расте у истом окружењу..

И диференцијални медији и селективни медији су веома корисни у области клиничке микробиологије и јавног здравља, јер ове дисциплине морају да открију присуство специфичних микроорганизама повезаних са лошим хигијенским условима или условима..

Твари за индикаторе могу да се додају култури која даје карактеристичну карактеристику жељеној колонији. На пример, агар-еозин-метиленско плаво (скраћено ЕМБ) и МацЦонкеи-агар се додају са лактозом и пХ индикатором.

Према томе, када се колонија развије у овим медијима са способношћу ферментације лактозе и производње алдехида, могу се посматрати у посебној боји.

Степс

Тренутно се медијум за културу може купити у лиофилизованом облику. Према томе, припрема је олакшана и само је производ рехидриран. Садржај мора бити измерен (узимајући у обзир коначну количину коју желите да припремите) и растворен у дестилованој води, пратећи све индикације производа.

Садржај течних подлога мора бити подељен у жељене контејнере (Петријеве посуде, епрувете, итд.) За накнадну стерилизацију. За дистрибуцију чврстог медија потребно га је растопити помоћу микроталаса или подвргавањем материјала воденом купатилу. ПХ медијума се мора подесити.

Обично се агар користи у епруветама или у Петријевим посудама. Ако се агар стврдњава у нагнутом положају, са одговарајућим углом, тако да је крајња крајња ивица дијагонална, овај распоред је познат као врх врха или нагнуте цеви. Када се агар стврдне у потпуно вертикалном положају назива се "дубоко".

Након стерилизације медија - помоћу аутоклава - допушта се да се охладе. Њима се мора руковати у окружењу без микроорганизама, а најчешћи је рад са упаљеним упаљачем који осигурава асептичну околину у његовој близини.

Референце

1. Целис, Ј. Е. (2006). Ћелијска биологија: приручник за лабораторију (Вол. 2). Елсевиер.
2. Финеголд, С.М., Баилеи, В.Р., Барон, Е.Ј., Финеглод, С.М., & Сцотт, Е.Г. (1991). Баилеи Сцотт: микробиолошка дијагноза. Пан Америцан Медицина.
3. Оливас, Е. (2004). Приручник праксе микробиологије И и ИИ и паразитологија. Аутономни универзитет Циудад Јуарез.
4. Сцхлегел, Х. Г., & Заборосцх, Ц. (1993). Генерал мицробиологи. Цамбридге Университи Пресс.
5. Тортора, Г.Ј., Функе, Б.Р., & Цасе, Ц.Л. (2007). Увод у микробиологију. Ед Панамерицана Медицал.