Половица СИМ фондација, припрема и употреба



Тхе пола СИМ-а То је полукрути и диференцијални агар, специјално дизајниран да помогне у идентификацији неких бактерија, углавном из породице Ентеробацтериацеае. Састоји се од триптина, пептона, сулфата гвожђа, амонијум сулфата, натријум тиосулфата и агара.

Овај медијум омогућава извођење три важна теста: производња сумпороводика (Х2С), формирање и покретљивост индола, отуда и акроним СИМ. Због велике корисности не може недостајати у бактериолошкој лабораторији.

За разлику од других медија, ово мора бити получврсто тако да се може детектовати капацитет кретања неких бактерија. У том смислу, овај тест веома добро функционише код Ентеробацтериацеае, али не у Грам-негативним, не-ферментирајућим бацилима, где је пожељно да се користе друге методе, као што је, на пример, пад на чекању..

СИМ медијум омогућава разликовање одређених специфичних својстава која карактеришу неке бактерије у односу на друге. На пример Есцхерицхиа цоли разликује се по Х2С (-), индол (+) и покретљивост (+), док Протеус мирабилис то је Х2С (+), индол (-), покретљивост (+).

Индек

  • 1 Фоундатион
    • 1.1 Извор напајања
    • 1.2 Производња водоник сулфида
    • 1.3 Формирање индола
    • 1.4 Мотилитет
  • 2 Припрема
    • 2.1 Халф СИМ
    • 2.2 Ковачев реагенс
    • 2.3 Ерлицх реагенс
  • 3 Усес
    • 3.1 Сеедед
  • 4 Контрола квалитета
  • 5 Ограничења
  • 6 Референце

Фоундатион

То је медијум културе који се сматра диференцијалним, јер његова употреба успева да направи разлику између микроорганизама који могу да производе водоник-сулфид од оних који то не чине; такође наглашава оне који формирају индол из триптофана оних који га не формирају и на крају диференцира покретљивост од непокретних бактерија.

Извор напајања

Као и сваки медиј културе, има елементе који обезбеђују неопходне хранљиве материје тако да се могу развити незахтевни микроорганизми. Ови елементи су представљени пептонима и триптином.

Развој микроорганизма у околини је неопходан да би се могло уочити присуство или одсуство карактеристика које се процењују овим медијумом.

Производња сумпороводика

Слово С акронима СИМ се односи на производњу сумпороводика (Х2С). Бактерије које могу формирати водоник-сулфид ће узети сумпор натријум тиосулфата.

Када се формира Х2С - безбојни гасови - реагују са сољу гвожђа у медијуму, формирајући жељезни сулфид, јасно видљив (црни талог). Бактерије које не формирају Х2С, оставите средину оригиналне боје (беж).

Присуство црног талога може ометати тумачење мотилитета. Међутим, познато је да већина ентеробактерија које производе Х2С су позитивни покретљивост, као што су Салмонелла, Протеус и Цитробацтер. Поред тога, црни талог који покрива скоро читав медијум, указује на позитиван покретљивост.

Индоле траининг

Друго слово акронима СИМ је "И", што представља формирање индола.

У том смислу, триптеина, поред тога што је извор хранљивих материја, испуњава још једну основну функцију. Овај пептон је богат аминокиселином званом триптофан, тако да може показати бактерије које производе триптофаназу.

Овај ензим је одговоран за исецање аминокиселине триптофана, што резултира формирањем индола (безбојне супстанце), пирувичне киселине и амонијака..

Због тога, да би се демонстрирала ова реакција, потребно је додати супстанцу која открива (Ехрлицх-ов реагенс или Ковац-ов реагенс). Било која од њих реагује са индолом, формирајући прстенасто-црвено-фуксијску супстанцу на површини агара. Ако се појави фуксија, индолски тест се тумачи као позитиван.

Бактерије које немају овај ензим неће формирати прстен и интерпретирати га као негативни индолски тест.

Важно је истаћи да би индолски тест требало да буде последњи који треба интерпретирати, јер када се реагенс дода, медијум постаје замагљен што отежава визуализацију мотилитета..

Мотилити

На крају, слово "М" речи СИМ означава покретљивост. Да би био у стању да процени мотилитет, овај медиј је стратешки получврст, јер је ова карактеристика неопходна да би се уочило да ли постоји или не постоји бактеријско кретање. Бактерије које имају флагеле су оне које дају овај позитиван тест.

Позитиван тест ће бити очигледан када се примети замућеност, како у почетном инокулуму, тако и око њега. Док се немобилне бактерије развијају само у почетној путањи инокулума.

Препаратион

Халф СИМ

Измерити 30 г дехидрираног медијума и растворити у једном литру дестиловане воде. Смеша се остави да одстоји 5 минута и затим се загреје до кључања, често мијешајући док се потпуно не отопи..

Раздвојити смешу у епрувете са памучним поклопцем и аутоклавирати на 121 ° Ц током 15 минута. Уклоните сталак за цеви из аутоклава и оставите га да се стврдне у усправном положају, тако да је медиј у облику блока..

За складиштење, чува се у фрижидеру док се не користи. Припремљени медијум мора имати коначни пХ од 7,3 ± 0,2.

У тренутку инокулације медија, мора бити на собној температури. Боја медија је беж.

Ковацов реагенс

Измерити 150 мл амила или изоамила или бутил алкохола. (Користите један од три поменута).

Растворити 10 г п-диметиламинобензалдехида. Затим полако додати 50 мл концентроване хлороводоничне киселине.

Реагенс спреман за употребу је безбојан или светло жут. Треба да се чува у флаши јантара и чува у фрижидеру. Не користити ако је тамно смеђе боје; што указује на оштећење. Овај реагенс је пожељан када се ради са ентеробактеријама.

Ерлицх реагенс

Измерити 2 г п-диметиламинобензалдехида и растворити у 190 мл апсолутног етил алкохола и полако мешати са 40 мл концентроване хлороводоничне киселине. Држите Ковачев реагенс на исти начин. Ехрлицх реагенс се више користи за не-ферментирајуће и анаеробне бактерије.

Усес

СИМ медиј се високо користи у лабораторијама за бактериологију. Као предност има то што се у истој епрувети могу уочити три битне карактеристике код идентификације Ентеробацтериацеае.

Совн

Исправан начин сијања овог медија је употребом игле, којом се узима дио чисте колоније за проучавање и умеће се у средиште медија вертикално. Мора се направити један потисак. Пункција не би требало да досегне дно цеви, исправна ствар је да покрије само две трећине дубине.

Не препоручује се понављање инокулума, јер то може довести до погрешних тумачења позитивног мотилитета. Инокулисана подлога се инкубира у аеробиози на 37 ° Ц током 24 сата.

Закључено је време када је уочена производња Х2С и мотилитет се чита. Коначно, индол је откривен, додајући 3 до 4 капи Ехрлицх-овог или Ковачевог реагенса, благо се меша и интерпретира.

Контрола квалитета

Као контрола стерилности, једна или две епрувете се инкубирају без инокулације у рерни на 37 ° Ц током 24 сата. Очекује се да након тог времена неће доћи до раста или промјене боје.

Као контрола квалитета могу се користити сертификовани познати сојеви, као што су: Есцхерицхиа цоли АТЦЦ 25922, Ентеробацтер аерогенес АТЦЦ 13048, Клебсиелла пнеумониае АТЦЦ 13883, Салмонелла типхимуриум АТЦЦ 14028, Схигелла соннеи АТЦЦ 29930, Протеус вулгарис АТЦЦ 13315.

Очекивани резултати су: Есцхерицхиа цоли Х2С негативан, индол и позитиван мотилитет, Ентеробацтер аерогенес само позитиван мотилитет, Салмонелла типхимуриум Х2С и позитивна покретљивост, са негативним индолом. Протеус вулгарис све позитивно, док Клебсиелла пнеумониае и Схигелла соннеи све негативно.

Ограничења

-Неки сојеви Морганелла моргании, међу осталим сојевима може настати смеђи пигмент у овом медију због производње меланина, не треба га мешати са преципитатом железовог сулфида. Код неискусних стручњака ова ситуација може генерисати лажне позитивне резултате у тумачењу Х теста2С.

-Строге аеробне бактерије ће расти само на површини цеви, што отежава тумачење мотилитета.

Референце

  1. БД Лабораториес ББЛ СИМ Медиум. 2008. Доступно на: бд.цом
  2. Неоген Лабораториес СИМ Медиум. Доступно на: фоодсафети
  3. Дифцо Францисцо Сориа Мелгуизо. СИМ Медиум. 2009. Доступно на: хттп://ф-сориа.ес
  4. Лабораториа Бризуела-Лаб СИМ Медиум. Доступно на: .бризуела-лаб.цом
  5. Лабораториес Британиа. СИМ Медиум. 2015. Доступно на: студирес.ес/доц
  6. Конеман Е, Аллен С, Јанда В, Сцхрецкенбергер П, Винн В. (2004). Микробиолошка дијагноза. 5тх ед. Едиториал Панамерицана С.А. Аргентина.