МИО темељна подлога, припрема и употреба



Тхе халф МИО је биохемијски тест који се користи да помогне у идентификацији врста бактерија које припадају породици Ентеробацтериацеае. Потпуно је хранљива и састоји се од глукозе, екстракта квасца, пептона, триптина, Л-орнитин хидрохлорида, бромокрезола и агара.

Значење њеног акронима (МИО) описује сваки од параметара који се могу посматрати у овом медију; мотилитет, индол и орнитин. Мотилитет је способност микроорганизма да се креће уз присуство флагела. Да би се ово својство могло посматрати, конзистенција медија мора бити получврста, тако да препарат има мању количину агара..

Производња индола доказује присуство ензима триптофаназе који делује на аминокиселину триптофан, пошто је неопходна употреба реагенса за откривање да би се производња индола учинила видљивом..

Коначно, орнитин одређује да ли је бактерија способна декарбоксилирати аминокиселину, тј. Ако има ензим оринитин декарбоксилазу.

Индек

  • 1 Фоундатион
    • 1.1 Пептон, екстракт квасца и триптин
    • 1.2 Мотилитет
    • 1.3 Глукоза
    • 1.4 Л-Орнитин
    • 1,5 пХ индикатор
  • 2 Техника засијавања и развоја
  • 3 Припрема
    • 3.1 МИО Медиум
    • 3.2 Ковацс реагенс (Индолски испитивач)
  • 4 Користите
  • 5 Контрола квалитета
  • 6 Референце

Фоундатион

Пептон, екстракт квасца и триптин

Ови елементи доприносе нутритивној снази овог медија. Они служе као извор хранљивих материја и есенцијалних аминокиселина за развој бактерија.

Поред тога, триптеин је извор триптофана који доказује присуство ензима триптофаназе, који разграђује триптофан редуктивном деаминацијом која ослобађа индол, пирувичну киселину, амонијак и енергију..

Индол је безбојан, тако да се његово присуство открива додавањем пет капи Ехрлицх или Ковацс реагенса, оба са п-диметиламинобензалдехидом.

Алдехидна група овог једињења реагује са индолом, стварајући прстенасто фуцхсиа-црвени производ на површини агара..

Било који траг боје треба сматрати позитивним доказом. Тест треба одмах прочитати, јер након неког времена боја се деградира.

С друге стране, овај тест треба да се открије након што се забележе резултати покретљивости и декарбоксилације орнитина..

Тумачење

Позитивни тест: формирање фуцхсиа црвеног прстена када се додаје Ковацс реагенс капи.

Негативни тест: нема формирања прстена.

Мотилити

Способност бактерија да се крећу ће се показати ако се посматра мутни медијум или ако постоји дебела линија раста која се шири око почетне инокулације..

Тест негативног мотилитета ће се показати посматрањем танке линије раста, и све ће бити без раста.

Важно је да се мотилитет прочита пре него што се открије индол, пошто додавање реагенса замагљује читав медијум.

У мобилним, али споро растућим бактеријама тешко је показати њихову покретљивост са овим медијем. У овом случају препоручује се употреба других тестова или метода, као што је медијум покретљивости или метода капања.

Глукоза

Глукоза је ферментабилни угљикохидрат који, поред обезбеђивања енергије, закисељује медијум, неопходан услов за декарбоксилацију аминокиселине орнитина.

Ферментација глукозе треба увек да се догоди, на основу принципа да све бактерије које припадају породици Ентеробацтериацеае ферментирају глукозу.

Л-Орнитин

Ако бактерија производи ензим орнитин декарбоксилазу, он може деловати када је медијум закисељен ферментацијом глукозе.

Ензим орнитин декарбоксилаза делује на карбоксилну групу аминокиселине која производи амин зван путресин који поново алкализира медијум.

Овај тест треба прочитати након 24 сата инкубације, јер ако покушате да прочитате пре него што погрешно протумачите тест са лажним негативним резултатом.

Мора се имати на уму да прва реакција која се дешава је ферментација глукозе, тако да медијум постане жут у почетној фази (првих 10 до 12 сати). Ако се декарбоксилација орнитина накнадно догоди, медијум ће постати љубичаст.

Важно је тумачити орнитински тест декарбоксилације пре откривања индола, пошто додавање Ковацс реагенса модификује боју медијума.

Тумачење

Негативни тест: средње жуте или са жутом позадином.

Позитивни тест: потпуно љубичаста.

ПХ индикатор

У овом случају користи се бромокрезол љубичаста; особа која је задужена за откривање када постоји промјена пХ у средини. Када је закишељен, индикатор постаје жут, а када је алкализован постаје љубичаст.

Семена и техника развоја

Да би се посадио МИО медијум, користи се равна петља или игла и са њом се сакупља део колоније за проучавање..

У МИО средству се прави равна линија. Није препоручљиво вршити дуплу пункцију, јер може дати лажну слику покретљивости ако се пункције не изводе на истом месту.

Инкубирајте 24 до 48 сати на 37 ° Ц у аеробиози. Посматрајте резултате у овом редоследу: мотилитет, декарбоксилацију орнитина и на крају откријте индол.

Препоручљиво је асептично узети 2 мл медија, пренети га у стерилну епрувету и извршити индолски тест тамо, тако да ако је негативан, остатак оригиналне епрувете може да се инкубира 24 часа, да се поново открије индол..

Развој индола се изводи на следећи начин: 3 до 5 капи Ковацс реагенса се додају у МИО медијум и снажно мешају. Проматра се ако се појави црвени прстен фуксије или не.

Препаратион

Пола МИО

Измерити 31 гр МИО медијума и растворити у једном литру дестиловане воде.

Загревати док мешавина не прокључа један минут, уз често мешање док се агар потпуно не раствори. Раздвојите 4 мл медијума у ​​13/100 епрувете са памучним поклопцем.

Стерилисати у аутоклаву на 121 ° Ц током 15 минута. Извадите из аутоклава и оставите да стоји равно у реку, тако да се формира полукрути блок.

Чувати у хладњаку 2-8 ° Ц. Оставите да се охлади пре садње бактеријског соја.

Боја дехидрираног медија је беж, а боја медијума припремљена благо љубичаста.

Крајњи пХ припремљеног медијума је 6.5 ± 0.2

Медиј постаје жут са киселим пХ и љубичаст је на алкалном пХ.

Ковацс реагент (Индолски испитивач)

Овај реагенс се припрема на следећи начин:

Мерено је 150 мл амила, изоамила или бутил алкохола (било које од три). У њему је растворено 10 г п-диметиламинобензалдехида. Затим се полако дода 50 мл концентроване хлороводоничне киселине.

Припремљени реагенс је безбојан или светло жут. Треба да се чува у флаши јантара и чува у фрижидеру. Тамно браон боја показује њено погоршање.

Такође, Ковацс реагенс се може заменити Ехрлицх реагенсом. Ово последње, које је осетљивије, пожељно је да открије индол у бактеријама које га производе у минималним количинама, као у неким Грам негативним не-ферментирајућим бацилима и неким анаеробима.

Усе

Овај медијум је тест који допуњује низ биохемијских тестова за идентификацију бактерија из породице Ентеробацтериацеае.

Подаци о декарбоксилацији орнитина служе за диференцијацију Схигелла соннеи, што даје позитивно, од Схигелла боидии, Схигелла флекнери и С. дисентериеае, који дају негатив.

Такође се разликује род Клебсиелла, који даје негативан, род Ентеробацтер, где је већина његових врста позитивна.

Контрола квалитета

Сваки пут када се припреми серија МИО медијума, може се извршити контролни тест. За то се користе познати или сертификовани сојеви за посматрање понашања медија.

Сојеви који се могу користити су Есцхерицхиа цоли, Морганелла моргании, Клебсиелла пнеумониае, Ентеробацтер аерогенес и Протеус мирабилис.

Очекивани резултати су Е. цоли и М. моргании. Дан М: +, И: + и О: +.

Клебсиелла пнеумониае даје све негативне (М: -, И: -, О :-). Протеус мирабилис и Ентеробацтер аерогенес дан М: + И: - и О: +.

Референце

  1. Мац Фаддин Ј. (2003). Биохемијски тестови за идентификацију бактерија од клиничког значаја. 3рд ед. Едиториал Панамерицана. Буенос Аирес Аргентина.
  2. Форбес Б, Сахм Д, Веиссфелд А. (2009). Микробиолошка дијагностика Баилеи & Сцотт. 12 ед. Едиториал Панамерицана С.А. Аргентина.
  3. Конеман Е, Аллен С, Јанда В, Сцхрецкенбергер П, Винн В. (2004). Микробиолошка дијагноза. 5тх ед. Едиториал Панамерицана С.А. Аргентина.
  4. Лабораториес Британиа. МИО Медио 2015. Доступно на: британиалаб.цом
  5. БД Лабораториес ББЛ мотилитет индол орнитин (МИО) средњи. 2007. Доступно на: бд.цом
  6. Валтек Лабораториес Медиум М.И.О. Мотилитет, Индол, Орнитин. 2010. Доступно на: андинамедица.цом